Méthode d’essai biologique servant à mesurer des plantes terrestres exposées à des contaminants dans le sol : chapitre 2

Section 2 - Organismes d'essai

• 2.1 Espèces
• 2.2 Source
• 2.3 Tri et préparation des graines
• 2.4 Entreposage des graines
• 2.5 État des graines

2.1 Espèces

Les organismes d'essai à utiliser dans la présente méthode d'essai biologique doivent être choisis dans la liste de 12 espèces de plantes terrestres fournie ci-dessous. La liste des espèces acceptables comprend cinq monocotylédones et sept dicotylédones :

monocotylédones

• agropyre du Nord (Elymus lanceolatus; anciennement Agropyron dasystachyum)
• blé dur (Triticum durum)
• boutelou gracieux (Bouteloua gracilis)
• fétuque rouge (Festuca rubra)
• orge (Hordeum vulgare)

dicotylédones

• carotte (Daucus carota)
• concombre (Cucumis sativus)
• laitue (Lactuca sativa)
• luzerne (Medicago sativa)
• radis (Raphanus sativus)
• tomate (Lycopersicon esculentum)
• trèfle violet (Trifolium pratense)

Pour certaines espèces végétales, il est recommandé d'utiliser des variétés particulières dans la méthode d'essai. Les variétés indiquées ci-après ont été utilisées avec succès dans l'élaboration de la méthode d'essai décrite dans le présent document : blé dur (var. Durum), carotte (var. Royal Chantenay), concombre (var. Marketmore 76 ou var. Marketer), fétuque rouge (var. traçante), laitue (var. Buttercrunch ou var. Grand Rapid), orge (var. Chapais), radis (var. Champion ou Cherry Belle) et tomate (var. Heinz 1439).

Le choix de plusieurs espèces d'essai devrait être fondé sur la sensibilité de l'espèce à la substance ou matière qui fait l'objet de l'essai, si elle est connue. Le nombre et les types des espèces choisies pour des études de grande ampleur (c.-à-d. effets plurispécifiques) dépendront du but de l'étude et des exigences réglementaires en vertu desquelles les essais sont réalisés. Le rapport entre le nombre de monocotylédones et le nombre de dicotylédones choisies variera selon les objectifs de l'étude^{Note de bas de page2}. L'importance écologique, agricole et physiologique des 12 espèces de plantes terrestres à utiliser dans la présente méthode d'essai biologique est résumée en 1.2.

L'essai doit être démarré avec des graines certifiées (c.-à-d. des graines dont la pureté et le taux de germination sont certifiés)^{Note de bas de page3}. Pour chacune des espèces d'essai, les graines doivent provenir du même lot et devraient être exemptes de fongicide, d'insecticide, de répulsif ou de tout autre agent chimique de prétraitement. Il est préférable d'utiliser des graines non traitées; toutefois, s'il n'est pas possible d'en obtenir et/ou si les objectifs d'un essai particulier seront plus sûrement atteints avec des graines traitées, on peut utiliser des graines traitées^{Note de bas de page4}. Des instructions détaillées sur l'achat, le tri, l'entreposage et l'état des graines sont fournies en 2.2, 2.3, 2.4 et 2.5.

Chaque espèce végétale possède des caractéristiques uniques qui influent sur son comportement dans un essai de toxicité; par conséquent, certaines procédures et conditions d'essai (c.-à-d. nombre de graines utilisé pour lancer un essai, durée de l'essai et critères de validité de l'essai) sont modifiées en fonction de l'espèce choisie afin de tenir compte de ces caractéristiques (v. 4.2, 4.3 et 4.4).

2.2 Source

Les graines utilisées pour lancer un essai de toxicité d'un sol devraient être obtenues auprès de semenciers privés ou de banques de semences du gouvernement. Lorsqu'on achète des graines certifiées, le fournisseur devrait fournir une preuve que les graines n'ont pas été prétraitées avec quelque substance que ce soit. Les renseignements suivants devraient accompagner tout achat de graines :

• espèce (noms scientifique et commun)
• variété
• qualité
• année de prélèvement
• poids du paquet (g ou kg)
• numéro de lot
• cultivar
• taux de germination (%)
• date de l'évaluation du taux de germination
• date de l'achat
• durée de conservation
• nom du fournisseur

La date à laquelle le paquet de graines est ouvert devrait également être consignée. De manière générale, il est recommandé d'acheter les graines au moins tous les ans^{Note de bas de page5}, de préférence dans l'année précédant la date de germination prévue; toutefois, un lot de graines donné peut être utilisé aussi longtemps que les graines satisfont aux critères de performance du témoin indiqués dans le présent document (v. 4.4) et sous réserve que la sensibilité de la graine ne varie pas de façon significative au fil du temps, selon les résultats des essais toxicologiques de référence (v. 4.9).

Voici une liste de fournisseurs auprès desquels on peut obtenir des graines de bonne qualité pour les essais de toxicité :

William Dam Seeds Ltd.
C.P. 8400
Dundas (Ont.)
Canada L9H 6M1
Téléphone : (905) 628-6641
Télécopieur : (905) 627-1729
Site Web
Espèces : carotte, concombre, fétuque rouge, laitue,luzerne, radis, tomate, trèfle violet

Rosebank Seed Farms Ltd.
7340 Perth Line 24
RR #2, Staffa (Ont.)
Canada N0K 1Y0
Téléphone : 1-888-289-9934
Télécopieur : (519) 345-9930
Espèce :  orge

Pickseed Canada Inc.
C.P. 3230
Sherwood Park (Alb.)
Canada T8A 2A6
Téléphone : (780) 464-0350
Télécopieur : (780) 464-0305
Site Web
Espèce :  agropyre du Nord

Alberta Nursery & Seeds Ltd.
C.P. 20
Bowden (Alb.)
Canada T0M 0K0
Téléphone : (403) 224-3544
Télécopieur : (403) 224-2455
Site Web
Espèces : fétuque rouge, radis

Prairie Moon Nursery
Route 3, C.P. 1633
Winona, NM
États-Unis 55987-9515
Téléphone : 1-866-417-8156
Télécopieur : (507) 454-5238
Site Web
Espèce :  boutelou gracieux

Early's Farm & Garden Centre Inc.
2615 Lorne Ave.
Saskatoon (Sask.)
Canada S7J 0S5
Téléphone : 1-800-667-1159
Télécopieur : (306) 931-7110
Site Web
Espèces : agropyre du Nord, carotte, laitue, radis

David T. Gehl, Unité de multiplication des semences
Systèmes de production durable
Ferme expérimentale d'Indian Head
Agriculture et Agroalimentaire Canada
C.P. 760
Indian Head (Sask.)
Canada S0G 2K0
Téléphone : (306) 695-2274
Télécopieur : (306) 695-3445
Courriel : gehl@agr.gc.ca
Espèce :  blé dur

Prairie Habitats
C.P. 10
Argyle (Man.)
Canada R0C 0B0
Site Web
Espèce :  boutelou gracieux

Il est possible d'obtenir la liste la plus récente des fournisseurs de semences à l'adresse suivante :

Laboratoire de toxicologie des sols
Centre de technologie environnementale
Environnement Canada
335 River Road
Ottawa (Ont.) K1A 0H3
Téléphone : (613) 990-9544

2.3 Tri et préparation des graines

Les graines d'une espèce donnée présentent des variations de taille, de forme et, parfois, de couleur. Cette absence d'uniformité dans l'aspect extérieur est souvent associée à des taux de germination différents, voire à des exigences différentes en matière de germination (ASTM, 1999b). Pour réduire au minimum la variance dans les résultats des essais, il est recommandé de trier les graines manuellement^{Note de bas de page6}afin que celles utilisées dans les essais aient une taille, une couleur et une « qualité » uniformes. Par « qualité » de la graine, on entend l'absence de taches sur le tégument et une forme régulière. Il est important d'éliminer les graines brisées ou endommagées, les enveloppes vides et autres débris végétatifs du lot de graines. Le tri est particulièrement important pour l'agropyre du Nord et l'orge, car les lots de graines de ces espèces sont susceptibles de contenir un certain nombre d'enveloppes vides. Pour certaines espèces d'essai, les graines peuvent être de taille variable, or il est important d'utiliser des graines de taille aussi uniforme que possible afin de réduire les variations dans un même récipient d'essai et entre les différents récipients (Aquaterra Environmental, 1998a). Il se peut qu'il soit nécessaire de tenir compte de l'uniformité de la couleur pour certaines espèces comme la luzerne^{Note de bas de page7}. Les graines qui portent des marques de contamination fongique sur le tégument ou qui semblent endommagées doivent être éliminées.

2.4 Entreposage des graines

Les graines devraient être conservées dans leur emballage en papier d'origine et entreposées à l'abri de la lumière, dans des contenants hermétiques étiquetés (p. ex. sacs de type ZiplockMD) à 4 ± 2 °C. Les graines d'essai doivent rester au réfrigérateur jusqu'au jour où l'essai débute (jour 0); il faut alors sortir les graines du réfrigérateur et attendre qu'elles se réchauffent à la température ambiante. Les graines ne doivent pas être conservées au congélateur, car cela pourrait les endommager (p. ex. dommages attribuables à la déshydratation ou à l'expansion par l'humidité pendant la congélation, pouvant aller dans certains cas jusqu'à l'éclatement de la graine).

2.5 État des graines

La sensibilité de chaque nouveau lot de graines utilisé dans un essai définitif de toxicité d'un sol doit être mesurée au moyen d'un essai toxicologique de référence (voir 4.9) de 7 ou 10 jours (selon l'espèce). Idéalement, il faudrait effectuer un essai toxicologique de référence pour chaque essai définitif. Toutefois, les laboratoires qui effectuent régulièrement des essais de toxicité de sols préféreront peut-être réaliser périodiquement des essais toxicologiques de référence (au moins tous les deux mois) avec une portion de chaque lot de graines utilisé pour les essais définitifs. Tous les essais avec un toxique de référence ou plus devraient être effectués dans les conditions et selon les procédures décrites en 4.9. Les critères utilisés pour juger de la validité d'un essai définitif particulier de toxicité d'un sol pour une espèce donnée (et, indirectement, de l'état du lot de graines utilisé dans l'essai), selon le comportement des organismes d'essai dans le sol témoin négatif, sont définis en 4.4.