ARCHIVÉE - Trousse Veratox de Neogen pour la détection de marqueurs des allergènes de l'œuf : évaluation de la performance

Avertissement: La publication de cette méthode dans le recueil ne sous-entend pas qu'elle est approuvée ou entérinée par Santé Canada.

Introduction

La présente étude a pour objet d'obtenir des données sur la performance de la trousse Veratox de Neogen, trousse commerciale de détection des œufs dans les aliments. Cette étude fait partie des mesures soutenues visant à évaluer les méthodes de détection des allergènes dans les aliments et à les intégrer dans le Recueil des méthodes. En raison de la nature des protéines de l'œuf, dont la structure est modifiée au chauffage, l'efficacité des conditions d'extraction et la réponse des tests basés sur les anticorps dépendent de l'état de l'œuf soumis à la détection (cru ou cuit). Pour cette raison, il est difficile pour un seul étalon standard de représenter l'œuf dans divers produits et états. Néanmoins, il a été possible de choisir un matériel qui peut être considéré comme matériel de référence selon la

définition adoptée par le Comité des méthodes sur les allergènes

(CMA). Une approche en deux étapes a été adoptée pour l'évaluation. Tout d'abord, le matériel de référence représentatif de l'œuf a été utilisé dans des expériences de récupération au cours desquelles des matrices d'aliments choisies ont été artificiellement fortifiées (échantillons fortifiés). Par la suite, des échantillons d'aliments auxquels on avait ajouté des quantités connues d'œuf dans des conditions pilotes de fabrication ont été analysés (échantillons naturels). Les résultats de ces expériences et la performance de la trousse dans chacune de ces conditions d'évaluation seront communiqués à mesure que les données deviennent disponibles.

Méthode évaluée : Trousse Veratox de Neogen pour les allergènes de l'œuf

Niveau d'évaluation : Évaluation complète conformément aux lignes directrices établies pour le Recueil des méthodes d'analyse des allergènes alimentaires.

Matériel de référence désigné : Poudre d'œuf entier NIST 8415. Ce matériel de référence est composé d'œufs entiers crus séchés par atomisation et provient du National Institute of Standards and Technology des États-Unis. Il est différent des étalons standards fournis dans la trousse Veratox de Neogen pour les allergènes de l'œuf.

Laboratoires participants

Laboratoire de recherche sur les allergènes alimentaires de Santé Canada
Immeuble Frederick G. Banting
Ottawa (Ontario)

Laboratoire de la Région de l'Ouest, Santé Canada
Burnaby (Colombie-Britannique)

Laboratoire du Québec, ACIA
Longueuil (Québec)

Laboratoire de l'Ouest du Canada, ACIA
Burnaby (Colombie-Britannique)

Laboratoire de Neogen
Lansing MI, USA

Niveaux de fortification

Les échantillons ont été fortifiés avec 0, 25 et 62,5 ppm de l'étalon NIST 8415. Ces niveaux sont conformes aux lignes directrices d'évaluation du Recueil, selon lesquelles les niveaux de fortification doivent engendrer une réponse de la trousse équivalant à environ 0, 2 et 5 fois la limite de quantification appliquée au matériel de référence donné.

Conditions de fortification

La fortification a été réalisée à l'aide de la poudre d'œuf NIST 8415 en suspension dans une solution de carboxyméthylcellulose (CMC), conformément à une méthode mise au point par Trucksess et coll., Preparation of Peanut Butter Suspension for Determination of Peanuts Using Enzyme-Linked Immunoassay Kits, publiée dans le Journal of AOACInternational, vol. 87(2), 2004. Les échantillons ont été fortifiés à trois niveaux différents et se sont vus assigner un code d'identification anonyme.

Matrices d'intérêt

Trois matrices différentes (pâtes alimentaires, pain de blé entier et crème glacée) ont été utilisées pour l'évaluation. Ces produits ont été choisis parce qu'ils sont les plus susceptibles de contenir des œufs dont la présence n'est pas déclarée. Le risque d'une faible contamination croisée est présent lorsque ces aliments sont fabriqués avec le même équipement qui sert à fabriquer des produits similaires renfermant des œufs. Les pâtes alimentaires, le pain et la crème glacée ont déjà été mis en cause dans des cas de non-­déclaration de la présence d'œufs.

Matériel et ressources

On a fourni à chaque laboratoire participant les éléments suivants :

• trousses Veratox de Neogen pour les allergènes de l'œuf complètes, y compris la notice du fabricant contenant des directives pour se servir de la trousse;
• échantillons codés à l'insu (30 de chaque matrice - 90 échantillons au total).

Méthode

Méthode de fortification

Les niveaux de fortification ont été choisis de façon à obtenir un résultat d'environ 5 ppm et 12,5 ppm (2 et 5 fois la limite de dosage) avec la trousse Veratox de Neogen pour les allergènes de l'œuf. L'étalon (standard) de la trousse de Neogen utilisé pour produire la courbe d'étalonnage est différent de l'étalon de poudre d'œuf NIST 8415. Par conséquent, il est prévu qu'il y aura une différence entre la quantité d'œuf utilisée pour fortifier les échantillons et la quantité d'œuf mesurée par la trousse. La quantité d'étalon NIST 8415 utilisée pour la fortification a donc été établie en conséquence. Une étude préliminaire a révélé que 25 ppm et 62,5 ppm de poudre d'œuf NIST 8415 étaient nécessaires pour obtenir un résultat équivalent à 5 ppm et à 12,5 ppm exprimés en unités de l'étalon de la trousse de Neogen. Les échantillons ont été fortifiés à l'aide d'une suspension de poudre d'œuf NIST 8415 dans une solution de CMC à laquelle ont été ajoutés de l'albumine bovine et du thimérosal. Une solution-mère de NIST 8415 dans le CMC à une concentration de 1 mg/g a été préparée, puis diluée dans une solution tampon phosphate saline (PBS) (1 g dans 8 mL pour l'échantillon fortifié à 25 ppm, 1 g dans 3,2 mL pour l'échantillon fortifié à 62,5 ppm). Des aliquotes de 1 mL de solution de fortification ont été ajoutées à chaque échantillon. Pour les échantillons non forifiés 1 g de solution CMC (1 mg/g) a été ajouté dans 8 ml de PBS (comme pour les échantillons fortifiés à 25 ppm, mais sans poudre d'œuf NIST).

Préparation des échantillons

Les 450 échantillons requis (10 réplicats de chacun des trois niveaux des trois produits pour cinq laboratoires) ont été préparés au laboratoire de recherche sur les allergènes alimentaires de Santé Canada. Des échantillons de 5 g ont été pesés dans des bouteilles à bouchon vissé de 250 mL (150 échantillons par produit). Les échantillons ont été séparés en groupes de 50, puis chaque groupe a été fortifié aux trois niveaux. Chaque échantillon s'est vu assigner un code numérique, puis les échantillons ont été regroupés pour les cinq laboratoires participants et distribués.

Extraction et analyse des échantillons

Chaque laboratoire a soumis les échantillons à une extraction en suivant la méthode indiquée dans la trousse de Neogen. L'extraction a été effectuée directement dans les bouteilles d'échantillons fournies. Un additif d'extraction et 125 mL de tampon d'extraction ont été ajoutés à chaque échantillon, après quoi, les échantillons ont été agités. Pour les échantillons de pâtes alimentaires, la méthode décrite par le fabricant de la trousse a été légèrement modifiée. Un problème est survenu avec la solution de fortification, qui a formé une masse gluante au contact du blanc de pâte alimentaire. Pour l'extraction à partir de ces échantillons de pâtes alimentaires seulement, les participants ont été priés d'ajouter une étape après l'ajout du tampon d'extraction et avant l'agitation : ils devaient effectuer une homogénéisation de courte durée au moyen d'un Polytron MC ou d'un dispositif d'homogénéisation similaire. Les laboratoires ont ensuite analysé les extraits d'échantillons avec la trousse Veratox de Neogen pour les allergènes de l'œuf en suivant la méthode indiquée sur la notice du fabricant. Les résultats ont été calculés au moyen du logiciel Log/Logit de Neogen.

Résultats

Un des laboratoires participants a éprouvé des difficultés avec les échantillons de pâtes alimentaires à cause du problème lié à la solution de fortification déjà mentionné. Les données de ce laboratoire concernant les échantillons de pâtes alimentaires ont été exclues. Les résultats de l'évaluation ont révélé une bonne concordance inter- et intralaboratoires. Avec les 420 autres échantillons, on n'a signalé aucun résultat faussement positif ni faussement négatif. Pour chaque groupe de dix échantillons dans une matrice donnée à l'un des trois niveaux de fortification qui a été analysé par un laboratoire (par exemple, les échantillons de pâtes alimentaires à 25 ppm du laboratoire n o 4) la moyenne et l'écart‑type ont été calculés. Tous les résultats dépassant 2 écarts‑types par rapport à la moyenne étaient considérés comme aberrants et ont été exclus. Sur les 420 échantillons, seulement 9 ont été exclus.

Par la suite, l'écart réduit a été calculé pour chaque produit alimentaire objet de l'étude, à chacun des niveaux de fortification et pour chaque laboratoire. Tous les résultats étaient inférieurs à 2,0, et la plupart des résultats étaient inférieurs à 1,0, ce qui révèle une assez bonne concordance entre les laboratoires participants.

Un résumé des résultats obtenus par chaque laboratoire est présenté ici.

Il faut noter que les quantités ajoutées pour la fortification sont indiquées en ppm de la poudre d'œuf NIST 8415, mais que les résultats obtenus avec la trousse sont en ppm de l'étalon de Neogen. Des résultats approximatifs de 5 ppm et de 12,5 ppm de l'étalon de Neogen étaient attendus pour les échantillons fortifiés avec 25 et 62,5 ppm de l'étalon d'œuf NIST 8415.

Conclusion

La trousse Veratox de Neogen pour les allergènes de l'œuf a donné des résultats satisfaisants avec les matrices et les niveaux utilisés au cours de l'évaluation.

Le choix de la poudre d'œuf NIST 8415 comme étalon pour l'évaluation est un compromis fondé sur la disponibilité des matériels de référence au moment de l'étude. Les données de l'évaluation, qui reposent sur l'étalon NIST 8415, seront complétées par d'autres données obtenues avec des échantillons alimentaires naturels ou avec un étalon différent. Ces résultats seront ajoutés à ce rapport une fois l'étude expérimentale complétée, afin de fournir davantage de données techniques étayant le fonctionnement de cette trousse commerciale.