Méthode d’essai biologique servant à mesurer des plantes terrestres exposées à des contaminants dans le sol : annexe E
Annexe E - Variantes des modes opératoires d’essais de mesure de la levée et de la croissance de plantes terrestres dans le sol, telles que décrites dans des méthodes de portée internationale
Les documents de base sont énumérés ici dans l'ordre chronologique, selon le sigle de l'organisme dont ils émanent, et non selon le nom de leurs auteurs.
OCDE (1984a) - lignes directrices normalisées pour vérifier les effets de substances chimiques sur la croissance de plantes terrestres, publiées par l'Organisation de coopération et de développement économiques (Paris, France) en 1984.
USEPA (1989) - protocole pour réaliser des essais de germination sur des graines de laitue (Lactuca sativa), publié en février 1989 par l'United States Environmental Protection Agency (co-auteurs : J.C. Greene, C.L. Bartels, W.J. Warren-Hicks, B.R. Parkhurst, G.L. Linder, S.A. Peterson et W.E. Miller); fait partie d'une série de protocoles d'examen préalable de la toxicité à court terme de dépôts de déchets dangereux.
ISO (1993a) - méthode d'essai normalisée internationale pour déterminer la toxicité d'un sol à l'aide de plantes terrestres et de la mesure de l'inhibition de la croissance des racines, publiée en 1993 par l'Organisation internationale de normalisation, Genève, Suisse.
ISO (1995) - méthode d'essai normalisée internationale pour déterminer les effets de substances chimiques sur l'émergence et la croissance de végétaux supérieurs, publiée par l'Organisation internationale de normalisation, Genève, Suisse.
ASTM-94 - méthode normalisée (E 1598-94) pour la réalisation d'essais de croissance de jeunes plantules afin d'évaluer la toxicité d'un sol, rédigée pour l'American Society for Testing and Materials (ASTM) sous la direction du sous-comité E47.11 de l'ASTM sur la toxicité pour les plantes et publiée en février 1998. En 2003, cette méthode a été retirée du catalogue des méthodes normalisées pour être incorporée en annexe à E 1963-98. Voir ASTM (1999b) dans les références.
ASTM-98 - guide normalisé (E 1963-98) pour la réalisation d'essais visant à évaluer la toxicité d'un sol pour des plantes terrestres (plus précisément, annexe A1 : levée des plantules) rédigé pour l'ASTM sous la direction du sous-comité E47.11 de l'ASTM sur la toxicité pour les plantes et publié en février 1998. Voir ASTM (1999b) dans les références.
EC (2000) - mode opératoire normalisé pour la réalisation d'essais toxicologiques sur des plantes terrestres fondés sur la mesure de la croissance de jeunes plantules, préparé en avril 2000 par D. Moul pour le Centre des sciences de l'environnement, région du Pacifique, Environnement Canada, North Vancouver (Colombie-Britannique).
| Document1 | Type d'essai | Durée de l'essai | Installation d'essai |
|---|---|---|---|
| OCDE (1984a) | sans renouvellement | ≥14 jours après la levée de 50 % des semis témoins | phytotron, serre, chambre de croissance de plantes5,6,7 |
| USEPA (1989) | sans renouvellement | 120 h | chambre à atmosphère contrôlée |
| ISO (1993a) | sans renouvellement | 36 à 48 h pour la prégermination des graines, 5 jours pour l'exposition 2,3 | chambre de croissance |
| ISO (1995) | sans renouvellement | 14-21 jours après la levée de 50 % des semis témoins | phytotron, serre, chambre de croissance de plantes |
| ASTM-94 | sans renouvellement | ≥21 jours après la levée de 50 % des plantes témoins; ~28 jours en tout4 | serre, chambre de croissance, phytotron5,6,7 |
| ASTM-98 | sans renouvellement | double du temps requis pour obtenir un taux de germination acceptable, arrondi à la semaine entière la plus procheFootnote 4 | serre, chambre de croissance, phytotron5,6,7 |
| EC (2000) | sans renouvellement | 7 jours8 | chambre à atmosphère contrôlée5,6,7 |
Notes de tableau
1 Voir les pages précédentes pour les références complètes.
2 La durée de l’essai peut être adaptée aux besoins d’autres espèces.
3 La durée de l’essai devrait être telle que la longueur des racines produites ne dépassera pas 80 % de la profondeur du sol dans le pot.
4 Exemple : le taux de germination de la laitue est de 90 % au bout de 4 jours; par conséquent, la durée de l’essai serait de 7 jours.
5 Sans contamination ni vapeurs toxiques.
6 Température recommandée maintenue.
7 Régulation de l’humidité raisonnable et éclairage supplémentaire.
8Jusqu’à 10 jours pour certaines espèces d’essai.
| Document | Description des organismes au début de l'essai | Espèces | Nombre d'espèces par batterie | Critères pour le choix de la batterie | Autres espèces?1 |
|---|---|---|---|---|---|
| OCDE (1984a) | graines d'une même classe, non humidifiées | v. tableau 1, annexe F | ≥5 | ≥1 de chaque catégorie2 | oui3 |
| USEPA (1989) | graines d'une même classe, non traitées | laitue (Lactuca sativa) | s.o.4 | s.o. | non |
| ISO (1993a) | graines prégermées, non traitées5 | orge (Hordeum vulgare L.)6 | s.o. | s.o. | oui7 |
| ISO (1995) | graines de taille uniforme, non traitées, non humidifiées | v. tableau 2, annexe F | ≥2 | ≥1 de chaque catégorie8 | n.i.9 |
| ASTM-94 | graines certifiées, de taille uniforme, d'un même lot, non traitées | v. tableau 3, annexe F | ≥5 | ≥3 dicots10,11,12 | oui12 |
| ASTM-98 | graines de taille et de couleur uniformes, d'un même lot, de préférence non traitées, pouvant être recueillies en plein champ | n'importe quelle espèce; liste des espèces couramment employées dans d'autres méthodes d'essai (FIFRA, TSCA, FDA, OCDE, APHA/AWWA, ASTM) | n.i. | n.i. | oui |
| EC (2000) | graines certifiées, de taille, de couleur et de forme uniformes, d'un même lot, non traitées | n'importe quelle espèce | 5 | 3 dicots13, 14 | oui |
Notes de tableau
1 Indique si des espèces autres que celles spécifiées dans la méthode peuvent être employées dans l’essai.
2 Au moins une espèce choisie dans chacune des trois catégories; v. tableau 1, annexe F.
3 D’autres espèces peuvent être utilisées si le principe qui a guidé leur choix est expliqué dans le rapport d’essai.
4 s.o. = sans objet
5 Les graines sont placées sur un papier filtre mouillé avec de l’eau distillée, dans une boîte de Petri, jusqu’à ce que la radicule commence à apparaître (radicule <2 mm de longueur); pour l’orge, la germination de la graine prend 36-48 h à 20 °C dans l’obscurité.
6 La variété d’orge CV Triumph est recommandée; néanmoins, on peut utiliser d’autres variétés.
7 Il est possible d’adapter la méthode pour employer d’autres espèces dicotylédones à racines droites facilement mesurables.
8 On choisit au moins une espèce dans chacune des deux catégories (dicotylédones et monocotylédones); v. tableau 2, annexe F.
9 n.i. = non indiqué.
10 ≥3 espèces de ≥2 familles (une légumineuse et un légume racine) de la liste des dicotylédones; v. tableau 3, annexe F.
11 ≥2 espèces de ≥1 famille, dont le maïs, de la liste des monocotylédones; v. tableau 3, annexe F.
12 Si les conseils pour le choix des espèces sont suivis.
13 3 espèces de ≥2 familles (une légumineuse et un légume racine); la laitue (Lactuca sativa) est recommandée.
14 ≥2 espèces de ≥1 famille, dont le maïs; l’orge (Hordeum vulgare) est recommandé.
| Document | Tri des graines | Semis | Réduction du nombre de semis | Entreposage des graines |
|---|---|---|---|---|
| OCDE (1984a) | n.i.1 | n.i. | n.i. | n.i. |
| USEPA (1989) | tri granulométrique à l'aide d'un crible métallique; inspection visuelle pour repérer les débris, les enveloppes vides et les graines endommagées à éliminer | semer les graines à 1,27 cm (0,5 po) du bord du récipient d'essai; enfoncer les graines dans le sol avec le fond d'un bécher propre; couvrir le sol d'essai avec une couche de sable | aucune | dans des contenants étanches à l'air et à l'eau, à 4 °C |
| ISO (1993a) | n.i. | 10 mm sous la surface du milieu d'essai | aucune | n.i. |
| ISO (1995) | n.i. | n.i. | après évaluation de la levée, éclaircir les plantules afin d'obtenir 5 spécimens représentatifs, régulièrement espacés | n.i. |
| ASTM-94 | n.i. | trous effectués à l'aide d'un gabarit; 1,0-1,5 cm de profondeur pour les petites graines; 2,5-4,0 cm pour les grosses graines2; tapoter légèrement les pots pour recouvrir les graines; l'emploi d'inoculums microbiens est facultatif | aucune | à 4 ± 2 °C |
| ASTM-98 | le tri granulométrique peut être effectué à l'aide d'un crible ou d'un tamis; inspection visuelle pour repérer les graines brisées ou endommagées à éliminer | trous effectués à la main ou à l'aide d'un gabarit; 1,0-1,5 cm de profondeur pour les petites graines; 2,5-4,0 cm pour les grosses graines2; tapoter légèrement les pots pour recouvrir les graines; l'emploi d'inoculums microbiens est facultatif | aucune | au dessiccateur, à 4 ± 2 °C |
| EC (2000) | les graines sont « triées manuellement » ou passées au crible pour obtenir une taille, une couleur et une forme uniformes; les graines endommagées sont éliminées | à l'aide d'un gabarit pour les petites graines; manuellement pour les grosses graines; recouvrir délicatement les graines avec le sol environnant | aucune | 4 ± 2 °C3 |
Notes de tableau
1 n.i. = non indiqué.
2 Les graines devraient être semées à une profondeur de 1,5 à 2 fois le diamètre de la graine.
3 Si les graines sont entreposées pendant ≥2 mois, des essais de germination de répétition sont effectués pour vérifier la viabilité des graines; les graines dont le taux de germination est inférieur au taux de germination certifié sont éliminées.
| Document | Récipient d'essai | Couvercle | Type de sol d'essai1,2 | Quantité de sol par récipient |
|---|---|---|---|---|
| OCDE (1984a) | pots émaillés ou en plastique non poreux de taille appropriée pour ne pas nuire à la croissance des plantes | n.i.3 | n.i. | n.i. |
| USEPA (1989) | moitiés inférieures de boîtes de Petri en plastique de 150 × 15 mm | sacs en polyéthylène de 35 × 35 cm (12 × 12 po) refermables hermétiquement | SA, DS et mélanges de ces matériaux; SAE | 100 g (masse sèche) de sol artificiel ou de sol d'essai; 90 g de sable de couverture |
| ISO (1993a) | pots cylindriques, 8 cm de diamètre × 11 cm de hauteur; côtés parallèles (non évasés); base du pot perforée (recouverte de papier filtre) | verre de montre | SA, SS, SR, DS et mélanges de ces matériaux; SAE, SRE | 500 g (masse sèche ) |
| ISO (1995) | pots émaillés ou en plastique non poreux dont la partie supérieure a un diamètre interne de 85-95 mm | n.i. | SA, SAE, SRE, SR4 | 500 g (masse sèche) |
| ASTM-94 | récipients en verre, en acier inoxydable ou en papier comportant des trous de drainage recommandés; possibilité d'utiliser des récipients en polyéthylène ou autre matière exempts de substances toxiques5; suffisamment grands pour ne pas nuire à la croissance des plantules pendant la durée de l'essai6 | n.i. | SA, DS, SAE, SRE | n.i. |
| ASTM-98 | récipients en verre, en acier inoxydable ou en papier comportant des trous de drainage recommandés; possibilité d'utiliser des récipients en polyéthylène ou autre matière exempts de substances toxiques5; suffisamment grands pour ne pas nuire à la croissance des plantules pendant la durée de l'essai6 | récipient muni d'un couvercle pendant la prégermination; couvercle retiré dès la levée des plantules | SA, SR, DS, SS et mélanges de ces matériaux; B, EL, SAE, SRE | 100-300 g (masse sèche nominale) |
| EC (2000) | boîte de Petri en plastique sans couvercle (100 × 15 mm), placée dans un sac de congélation en plastique à fermeture hermétique (GladMD) de 18 × 20 cm, placé dans une jarre en verre de 1 L de 15 × 23 cm (6 × 9 po) fermant hermétiquement | oui | SA, SS, B, SR et mélanges de ces matériaux; SAE, SRE | 50 g (masse sèche) |
Notes de tableau
1 Voir la description au tableau 3 de la présente annexe.
2 B = boues ménagères ou industrielles; DS = déchet solide; EL = éluats; SA = sol artificiel; SAE = sol artificiel enrichi; SR = sol de référence; SRE = sol de référence enrichi; SS = sol de site.
3 n.i. = non indiqué.
4 La méthode peut être modifiée pour être utilisable avec des déchets solides, des sols de site et des sols de site enrichis.
5 Vérification avant l’essai que le milieu de croissance convient aux espèces d’essai et aux conditions de l’essai.
6 Les récipients d’essai (p. ex. des pots de fleurs) sont inertes en présence de substances d’essai et de substances témoins (p. ex. la substance d’essai n’adhère pas au récipient d’essai ou ne réagit pas avec ce récipient).
| Document | Description du ou des sols d'essai | Description du sol artificiel1 |
|---|---|---|
| OCDE (1984a) | solides incorporés dans les sols; substances chimiques aqueuses mélangées dans le sol; pas nécessairement stérile; teneur en carbone <1,5 % (3 % de matière organique); teneur en particules fines (<20 µm) de 10-20 % | n.i.2 |
| USEPA (1989) | déchets solides dangereux (sol contaminé) ou substances chimiques aqueuses mélangées dans un sol artificiel | sable siliceux lavé 20 mesh; sable de couverture 16 mesh (tamisé pour éliminer les particules fines; 20 mesh) |
| ISO (1993a) | sol de référence ou sol de site potentiellement toxique; solides incorporés dans des sols, déchets ou substances chimiques aqueuses mélangées dans le sol; ou bien, sol dilué avec un sol de référence ou un sol artificiel | sable industriel lavé ou matériau similaire; composition granulométrique : 10 % >0,6 mm, 80 % 0,2-0,6 mm, 10 % <0,2 mm |
| ISO (1995) | sol de référence ou sol de site potentiellement toxique; solides incorporés dans des sols, déchets ou substances chimiques aqueuses mélangées dans le sol; ou bien, sol dilué avec un sol de référence ou un sol artificiel | sol artificiel stérile ou non stérile tamisé (4-5 mm); teneur en carbone ≤1,5 % (3 % de matière organique); particules fines (<0,02 mm) ≤20 % en fonction de la masse sèche3 |
| ASTM-94 | solides incorporés dans des sols; substances chimiques aqueuses pulvérisées sur le sol ou mélangées dans le sol; « sol ordinaire » contenant <5 % de matière organique recommandé | mélanges de sols synthétiques (tamisés, 2,0 mm), billes de verre ou sable quartzeux lavé |
| ASTM-98 | sol de référence ou sol de site potentiellement toxique; solides incorporés dans des sols; substances chimiques aqueuses ou boues pulvérisées sur le sol ou mélangées dans le sol; ou bien, sol dilué avec un sol de référence ou un sol artificiel | mélanges de sol synthétique ou sable quartzeux lavé |
| EC (2000) | sol de référence ou sol de site potentiellement toxique; boues ménagères ou industrielles; sol enrichi de substances chimiques ou sol dilué avec un sol de référence ou un sol artificiel | 10 % de tourbe mousseuse tamisée (2,36 mm), 20 % de kaolin (argile) et 70 % de sable siliceux de « qualité 70 »; pH ajusté à 7,0 avec du CaCO3 |
Notes de tableau
1 Les pourcentages sont exprimés en fonction de la masse sèche.
2 n.i. = non indiqué.
3 Il est conseillé d’ajouter du sable aux sols naturels afin de porter la teneur en matière organique ou en particules fines à l’intérieur de limites acceptables.
| Document | Description du sol témoin | Description du sol de référence |
|---|---|---|
| OCDE (1984a) | n.i.1 | s.o.2 |
| USEPA (1989) | 100 % de sol artificiel3 | n.i. |
| ISO (1993a) | sol de référence et/ou sol artificiel, le cas échéant3 | sol de la même classe de texture que le sol d'essai ou d'une classe aussi semblable que possible (sans les toxiques) |
| ISO (1995) | sol de référence et/ou sol artificiel, le cas échéant3 | sol d'une classe de texture semblable à celle du sol d'essai (sans les toxiques) |
| ASTM-94 | sol de référence et/ou sol artificiel, le cas échéant3 | sol naturel (exempt de contaminants chimiques) tamisé (p. ex. 2,0 mm), modifié au besoin pour obtenir des caractéristiques particulières (% argile, limon, sable et matière organique) |
| ASTM-98 | sol de référence et/ou sol artificiel, le cas échéant3 | Sol naturel (exempt de contaminants chimiques) |
| EC (2000) | sol de référence et/ou sol artificiel, le cas échéant3 | Sol prélevé sur le terrain dans une zone qui n'a pas été cultivée ou qui n'a pas reçu de pesticides ou d'engrais au cours des 25 dernières années |
Notes de tableau
1 n.i. = non indiqué.
2 s.o. = sans objet.
3 V. tableau 5, présente annexe.
| Document | Conditions d'entreposage | Caractérisation du sol |
|---|---|---|
| OCDE (1984a) | n.i.1 | n.i. |
| USEPA (1989) | placer dans un sac en plastique (double sac) scellé, puis dans un seau; refroidir à 4 °C, expédier sur de la glace, entreposer à 4 °C; démarrer l'essai dans les 24 h suivant le prélèvement | teneur en humidité des sols de site; CRE des sols artificiels et des sols de site2; pH au début et à la fin de l'essai |
| ISO (1993a) | n.i. | n.i. |
| ISO (1995) | s'il n'est pas stérile, entreposer selon la norme ISO 10381-6 | n.i. |
| ASTM-94 | n.i. | sol ordinaire caractérisé : matière organique, pHe3, texture et type du sol, capacité d'échange cationique et principales matières nutritives |
| ASTM-98 | placer dans un sac en plastique (double sac) scellé, puis dans un seau | CRE |
| EC (2000) | dans l'obscurité à <8 °C | teneur en humidité et pH |
Notes de tableau
1 n.i. = non indiqué.
2 CRE = capacité de rétention d’eau.
3 pHe = pH dans l’eau.
| Document | Mélange | Durée de conservation de l'échantillon | Hydratation | Ajustement du pH |
|---|---|---|---|---|
| OCDE (1984a) | passer au crible (mailles de 0,5 cm); utiliser n'importe quelle méthode de mélange permettant une dispersion uniforme de la substance d'essai dans le sol; ne pas employer de surfactif; on peut utiliser un solvant1 | l'essai doit débuter <24 h après l'incorporation de la substance d'essai dans le sol | n.i.2 | n.i. |
| USEPA (1989) | homogénéiser la matière d'essai solide avec le sol artificiel à l'aide d'un mélangeur; ou bien, hydrater le sol artificiel avec des échantillons d'essai aqueux | ne doit pas dépasser 36 h; l'essai devrait débuter ≤24 h après la collecte de l'échantillon | hydrater à 85 % de la CRE avec de l'eau désionisée3 | si pH <4 ou >104 |
| ISO (1993a) | sol artificiel/sol d'essai séché à 30 ± 2 °C pendant 16 h; tamiser (tamis de 4 mm); homogénéiser la matière d'essai solide avec un sol artificiel ou un sol de référence, ou hydrater le sol d'essai avec des échantillons d'essai aqueux; on peut employer des solvants5,6 | n.i. | maintenir une teneur en humidité équivalant à 70 ± 5 % de la CRE avec de l'eau désionisée | n.i. |
| ISO (1995) | n'importe quelle méthode permettant une répartition uniforme de la substance chimique dans le sol; homogénéiser la matière d'essai solide avec un sol artificiel ou un sol de référence, ou hydrater le sol d'essai avec des échantillons d'essai aqueux; on peut employer des solvants5,6 | l'essai doit débuter <24 h après l'incorporation de la substance d'essai dans le sol; si des matières nutritives sont ajoutées au sol ou au solvant utilisé, permettre au sol d'atteindre l'équilibre avant de démarrer l'essai (24 h si un solvant est utilisé) | selon les besoins, avec de l'eau désionisée7 | n.i. |
| ASTM-94 | substance d'essai ajoutée au milieu d'essai par mélange, par pulvérisation à la surface du sol ou par sub-irrigation; on peut employer des solvants8 | n.i. | au début, sans saturer le sol | facultatif, si le pH se situe à l'extérieur de la fourchette 6,0-7,59 |
| ASTM-98 | de préférence, mélanger la substance d'essai ou le sol contaminé directement avec le milieu d'essai; il est possible de préparer une solution mère5 et de l'ajouter au milieu d'essai; on peut employer des solvants11, 12 | n.i. | hydrater avec de l'eau désionisée jusqu'à obtention d'une teneur en humidité équivalant à la CRE du sol d'essai, au début de l'essai | facultatif, si le pH se situe à l'extérieur de la fourchette 6,0-7,59 |
| EC (2000) | passer au crible (4-9 mm) au besoin, auquel cas il faut sécher jusqu'à obtention d'une teneur en humidité de 10-20 %; mélanger; hydrater; on peut employer des solvants | n.i. | hydrater jusqu'à obtention d'une teneur en humidité de ~35 % de la masse sèche pour chaque sol d'essai, seulement au moment du mélange ou de la préparation des sols d'essai; après les semis, hydrater à saturation | n.i. |
Notes de tableau
1 Emploi d’un solvant: dissoudre la substance chimique dans un solvant volatil; mélanger la solution avec du sable; laisser le solvant s’évaporer; mélanger le sable avec le sol; conserver un rapport sable/sol constant pour tous les traitements, y compris le témoin.
2 n.i. = non indiqué.
3 CRE = capacité de rétention d’eau.
4 Si le pH se situe à l’extérieur de la fourchette 4-10, les résultats pourraient s’expliquer par l’effet du pH sur la toxicité; une modification du pH du sol peut entraîner une augmentation ou une réduction (selon le contaminant) de la toxicité des contaminants contenus dans le sol.
5 Pour les substances chimiques peu solubles dans l’eau, dissoudre la substance dans l’eau; mélanger avec du sable; mélanger le sable traité avec le sol.
6 S’il est nécessaire d’utiliser un solvant, dissoudre la substance chimique dans un solvant volatil et mélanger avec du sable; sécher le sable sous courant d’air, sans cesser de mélanger; mélanger le sable avec le sol; veiller à utiliser la même quantité de solvant et de sable pour tous les traitements, y compris le témoin.
7 La CRE appropriée devrait être déterminée au préalable et maintenue pendant toute la durée de l’essai (p. ex. 80 % pour Avena sativa et 60 % pour Brassica rapa)
8 Pour les substances d’essai peu solubles dans l’eau, il pourrait être nécessaire de les dissoudre dans un solvant organique tel que l’acétone. On peut ajouter la solution mère de solvant et de substance chimique à du sable quartzeux ou à des billes de verre qu’on laisse à sécher. On peut ensuite mélanger le sable et/ou les billes de verre avec le sol et procéder à l’essai, ou déposer les graines dans le sable ou les billes de verre avec une solution nutritive.
9 Pour augmenter le pH, on ajoute du carbonate de calcium; pour abaisser le pH, on ajoute de l’acide sulfurique, du gypse ou du sulfate d’ammonium.
10 Si l’on utilise une solution mère, il convient de déterminer la concentration et la stabilité de la substance d’essai dans la solution mère avant le début de l’essai.
11 La concentration du solvant dans les solutions d’essai devrait être maintenue à ≤1 %, volume/volume ou masse/volume (cette règle ne s’applique pas aux ingrédients d’un mélange préparé ou d’un produit commercial).
12 Si la concentration du solvant n’est pas la même dans toutes les solutions d’essai, il faut réaliser un essai avec le solvant ou bien disposer des résultats d’un essai préalable avec le solvant.
| Document | Nombre de graines par récipient | Nombre de répétitions par traitement ou par concentration | Nombre de concentrations par échantillon ou matière d'essai | Facteur de dilution/taux d'application recommandé |
|---|---|---|---|---|
| OCDE (1984a) | ≥5 | ≥4 | 3, plus un témoin | 0; 1,0; 10,0; 100 mg/kg de sol, m.s.1 |
| USEPA (1989) | 40 | 3 | ≥5, plus un témoin | 0,5 (p. ex. 100 %, 50 %, 25 %); m.s. de déchets dangereux/m.s. de sols artificiels, plus un témoin (sol artificiel pur à 100 %) |
| ISO (1993a) | 6 | 3 | concentration la plus élevée pour la substance d'essai ≤1000 mg/kg m.s. | série géométrique, ≥0,5 |
| ISO (1995) | 20 (réduire pour obtenir 5 plantules)2 | 4 | concentration la plus élevée pour la substance d'essai ≤1000 mg/kg m.s. | série géométrique, ≥0,5 |
| ASTM-94 | ≥15 par concentration | n.i. | ≥5, plus un témoin | n.i.3 |
| ASTM-98 | 5-204 | 5 | selon le but de l'étude | n.i. |
| EC (2000) | 5-104 | 5 | ≥9, plus un témoin | n.i. |
Notes de tableau
1 m.s. = masse sèche.
2 V. tableau 3, présente annexe.
3 n.i. = non indiqué.
4 Le nombre de graines par récipient dépend de la taille des graines et des plantules, ainsi que des exigences de l’essai.
| Document | Température (°C) | Conditions d'éclairage | Humidité | Gamme de pH | Arrosage |
|---|---|---|---|---|---|
| OCDE (1984a) | appropriée aux espèces d'essai | appropriées aux espèces d'essai | appropriée aux espèces d'essai | 5,0-7,5 | selon les besoins |
| USEPA (1989) | 24 ± 2 °C | obscurité pendant 48 h; puis 16 h de lumière et 8 h d'obscurité, 4 300 ± 430 lux; fluorescent | n.i.1 | 4,0-10,0 | aucun |
| ISO (1993a) | 20 ± 2 °C, jour; 16 ± 2 °C, nuit | 12-16 h de lumière et 8-12 h d'obscurité; 25 000 lm/m2 | 60 ± 5 % | n.i. | maintenir à 70 % de la CRE2 |
| ISO (1995) | appropriée aux espèces d'essai | appropriées aux espèces d'essai3 | appropriée aux espèces d'essai | 5,0-7,5 | ajustement quotidien à un pourcentage prédéterminé de la CRE |
| ASTM-94 | température de l'air 20-30 °C | ≥14 h de lumière; fluorescent/ incandescent ou solaire; ≥300 µmol/(m2 · s) [300- 400 µmol/ (m2 · s) recommandé] |
>30 %; ≥50 % recommandé | 6,0-7,5 | selon les besoins; solution nutritive une fois par semaine si le milieu employé est du sable quartzeux, des billes de verre ou un sol à faible teneur en matières nutritives |
| ASTM-98 | appropriée aux espèces d'essai; température de l'air 20-30 °C | 16 h de lumière et 8 h d'obscurité; incandescent; 100-200 µmol/ (m2 · s) (RPE 400-700 ηm)4 |
>30 %; ≥50 % recommandé | 6,0-7,5 | une fois les couvercles retirés, arroser selon les besoins (au moins une fois par jour) jusqu'à saturation ou moins (p. ex. à 85 % de la CRE) |
| EC (2000) | 24 ± 2 °C | 16 h de lumière et 8 h d'obscurité5; spectre complet (Duro-testMD); 4 300 ± 430 lux [765 µmol/(m2 · s)] |
n.i. | >4, <10 | hydraté à saturation; eau désionisée pulvérisée sur la surface du sol |
Notes de tableau
1 n.i. = non indiqué.
2 CRE = capacité de rétention d’eau.
3 La méthode recommande 16 h de lumière du jour et une intensité lumineuse minimale de 7 000 lux à une longueur d’onde adaptée à la photosynthèse.
4 RPE = rayonnement photosynthétiquement efficace.
5 Les petites graines semées à la surface devraient rester dans l’obscurité pendant les 48 premières heures.
| Document | MesuresFootnote1 | Observations biologiques |
|---|---|---|
| OCDE (1984a) | n.i.2 | taux de levée par répétition3; masse sèche ou humide par répétition, exprimée par plante4 |
| USEPA (1989) | pH du sol au début et à la fin de l'essai; température du sol au début de chaque période d'exposition de 24 h dans chaque concentration d'essai et dans le témoin (1 répétition) | taux de germination dans chaque répétition5 |
| ISO (1993a) | n.i. | longueur de la plus longue racine de chaque plante à la fin de l'essai6 |
| ISO (1995) | confirmation de la concentration de la substance d'essai à la fin de l'essai7 | taux de levée dans chaque répétition3; masse sèche ou humide moyenne des pousses par répétition, à la fin de l'essai8 |
| ASTM-94 | photopériode; intensité lumineuse, quotidiennement; mesure en continu de la température de l'air et de l'humidité relative (température du sol d'un pot représentatif); pH (pHe9>) au moment de la préparation du sol d'essai et à la fin de l'essai | nombre de plantules levées10; délai de levée pendant la première semaine; taux de survie; hauteur des plantes; longueur des radicules (racines); masse sèche de la portion aérienne et des racines; gravité de la phytotoxicité (observations qualitatives) |
| ASTM-98 | irradiance lumineuse au début et à la fin de l'essai; mesure en continu (au moins une fois par jour) de la température de l'air, de l'humidité relative et de la pression barométrique; température du sol d'un pot représentatif; pH du sol ou pHe9 au moment de la préparation du sol d'essai et à la fin de l'essai | nombre de plantules levées11; anomalies qualitatives dans la croissance, le développement ou la morphologie à la fin de l'essai; de manière facultative, longueur des pousses et des racines et masse sèche des pousses et des racines13 |
| EC (2000) | mesure en continu de la température et de l'intensité lumineuse; pH et conductivité au début et à la fin pour chaque traitement; taux d'humidité au début | nombre de plantules levées14; longueur des pousses et longueur de la racine la plus longue; observations quantitatives des effets phytotoxiques |
Notes de tableau
1 Les mesures comprennent le pH (concentration en ions hydrogène), la température, la lumière, l’humidité, etc.
2 n.i. = non indiqué.
3 Levée = apparition de la plantule hors du sol.
4 Mesurer la masse humide de la plante immédiatement après la récolte, ou la masse sèche après séchage au four à 70 °C.
5 Germination = la plantule fait saillie à la surface du sol.
6 On peut également mesurer la longueur de la pousse.
7 Il est recommandé de consigner la température et l’humidité.
8 Masse fraîche mesurée immédiatement après avoir coupé les pousses hors du sol ou masse sèche après séchage au four à 70-80 °C pendant 16 h.
9 pHe = pH dans l’eau.
10 Levée = la crosse de l’hypocotyle ou les premières feuilles vraies (coléoptile) sont observées hors du sol.
11 Levée = épicotyle hors du sol.
12 Les mesures relatives aux pousses sont prises du point de transition entre l’hypocotyle et la racine au point le plus haut de la pousse; les mesures relatives aux racines sont prises du point de transition entre l’hypocotyle et la racine à l’extrémité de la racine.
13 Séchage au four à 70 °C jusqu’à obtention d’une masse constante (on recommande 24 h).
14 Levée = la pousse atteint 3 mm hors du sol.
| Document | Fin de l'essai | Paramètres biologiques | Paramètres statistiques |
|---|---|---|---|
| OCDE (1984a) | compter le nombre de plantes levées par répétition et déterminer la masse moyenne des plantes | taux de levée; taux d'inhibition de la croissance à la fin de l'essai | CL50 pour la levée CE50 pour la croissance |
| USEPA (1989) | compter le nombre de plantules qui font saillie à la surface du sol (germination) | taux de mortalité (absence de plantules) | CL501 |
| ISO (1993a) | coucher chacun des pots sur le côté dans une cuve remplie de 5 cm d'eau, puis éliminer le sol des pots et laver chaque plante; mesurer la racine la plus longue à 0,5 mm près | longueur moyenne des racines | CSEO/CMEO |
| ISO (1995) | compter le nombre de plantes qui lèvent par répétition et déterminer la masse totale des pousses par répétition | taux de levée; masse moyenne2 | CE50 |
| ASTM-94 | compter le nombre de plantes levées; pour déterminer le rendement pour chaque espèce de plante, récolter la portion aérienne de chaque plantule ou la portion souterraine pour les racines et sécher au four | taux de levée; délai moyen de levée; hauteurs moyennes et/ou longueurs des racines; masse; notes accordées aux effets phytotoxiques qualitatifs | moyenne, LC à 95 % et ET pour chaque ensemble de données quantitatives; CSEO/CMEO, CE501 |
| ASTM-98 | compter les plantules hors du sol; observations qualitatives; mesures quantitatives facultatives | taux de levée; longueur moyenne des pousses et des racines (facultative); masse sèche moyenne | moyenne, LC à 95 % et ET pour chaque ensemble de données quantitatives; CSEO/CMEO, CE50, CEx et CIp1 |
| EC (2000) | compter le nombre de plantules levées; photographier les pots pour montrer la phytomasse aérienne; procéder à des observations qualitatives; séparer les plantes du sol et laver les racines pour déloger le sol; mesurer la longueur des pousses et la longueur de la racine la plus longue | taux de levée; longueur moyenne des pousses et des racines; notes accordées aux effets phytotoxiques qualitatifs | CL501 , CI50, CI25, CSEO/CMEO |
Notes de tableau
1 Y compris les limites de confiance (LC) à 95 %.
2De préférence la masse sèche; v. tableau 11, présente annexe.
| Document | Exigences de validité de l'essai | Toxique(s) de référence | Mode opératoire et conditions de l'essai toxicologique de référence |
|---|---|---|---|
| OCDE (1984a) | ≥80% des graines témoins produisent des plantules saines; les plantules témoins présentent une croissance normale tout au long de l'essai | aucune substance de référence recommandée | les résultats de tout essai avec une substance de référence devraient être fournis |
| USEPA (1989) | taux moyen de survie ≥90% | SDS, NaPCP ou CdCl21 | employer un sol artificiel pur à 100 % et des concentrations d'essai du toxique de référence dilué dans l'eau désionisée utilisée pour hydrater le sol afin de déterminer la CL50 120 h pour chaque lot de graines; porter les résultats sur une carte de contrôle; l'essai n'est pas valide si le taux moyen de survie est <90 % |
| ISO (1993a) | n.i.502 | n.i. | n.i. |
| ISO (1995) | 5 plantules saines par pot témoin | trichloroacétate de sodium | réalisation d'un essai toxicologique de référence si un changement important quelconque est apporté au mode opératoire (p. ex. chambre d'essai, régime d'arrosage) |
| ASTM-94 | en moyenne, la croissance des plantules témoins ne présente pas de signes de phytotoxicité ou d'anomalies du développement; taux de survie des plantules témoins ≥90 % pendant la période d'exposition | aucune substance chimique de référence requise ou recommandée | n.i. |
| ASTM-98 | en moyenne, la croissance des plantules témoins ne présente pas de signes de phytotoxicité ou d'anomalies du développement; le taux de survie pendant la période d'exposition satisfait aux normes minimales applicables à l'espèce considérée (taux de survie moyen des plantules témoins ≥80 % à moins qu'un critère inférieur ne soit établi pour cette espèce) | bore sous forme d'acide borique | une solution d'acide borique à la concentration voulue est ajoutée au sol d'essai (série de dilutions avec un facteur de dilution de 0,5 et 7 concentrations entre 10 et 640 mg/kg de sol, masse sèche)3; substances de remplacement permises; l'essai n'est pas valide si le taux moyen de survie des plantules témoins est <80 % |
| EC (2000) | taux de survie des plantules témoins ≥90 % (répétitions combinées); pourcentage de plantes témoins ne présentant pas de signes de stress ≥90 % (p. ex. chlorose, difformité) | chlorure de potassium | tous les deux mois, avec les lots de graines utilisés dans les essais et après l'acquisition de nouvelles graines; porter les résultats sur une carte de contrôle |
Notes de tableau
1 SDS = dodécylsulfate de sodium; NaPCP = pentachlorophénate de sodium; CdCl2 = chlorure de cadmium.
2 n.i. = non indiqué.
3On peut utiliser un plus petit nombre de concentrations une fois que la gamme de sensibilités pour une espèce d’essai donnée a été établie.