Méthode d’essai biologique servant à mesurer la survie de collemboles exposés à des contaminants dans le sol : annexe E


Annexe E

Variantes des modes opératoires pour l’élevage de collemboles, telles que décrites dans les méthodes d’essai et les guides internationaux pour la mesure de la toxicité des sols à l’aide de diverses espèces de collemboles

Les documents de base sont énumérés ici dans l’ordre chronologique, selon les auteurs ou le sigle de l’organisme dont ils émanent. (Voir la section « Références » pour des détails complets.)

W & K (1998) (Wiles et Krogh, 1998) - document décrivant des protocoles de mesure des effets de substances chimiques sur la survie, la croissance et la reproduction de trois espèces de collemboles, à savoir Folsomia candida (Willem, 1902), Isotoma viridis (Bourlet, 1839) et F. fimetaria (Linné, 1758); publié en 1998 dans Handbook of Soil Invertebrate Toxicity Tests, Løkke et van Gestel (dir.), West Sussex, Angleterre.

ISO (1999) - méthode d’essai normalisée internationale pour déterminer la toxicité d’un sol à l’aide d’un essai de mesure des effets sur la reproduction de F. candida, publiée en 1999 par l’Organisation internationale de normalisation, Genève, Suisse.

OCDE (2005) - ébauche de proposition soumise par l’Institut national de recherche sur l’environnement du Danemark à l’OCDE, en vue de la publication d’une nouvelle ligne directrice pour l’évaluation des effets de sols enrichis avec une substance chimique sur la reproduction de deux espèces de collemboles (F. candida et F. fimetaria); actuellement à l’étude par l’OCDE, Paris, France.

1. Source du stock de géniteurs pour l’élevage

Espèce expérimentale
Source initiale
W & K (1998)
Folsomia candida (Willem, 1902)
on peut obtenir des élevages de départ à partir de nombreux élevages de laboratoire existants
W & K (1998)
F. fimetaria (Linné, 1758)
on peut obtenir des géniteurs à partir d’échantillons de sol prélevés dans des champs, des prés ou des prairies, par extraction à la chaleur/à sec
W & K (1998)
Isotoma viridis (Bourlet, 1839)
on peut obtenir des géniteurs sur le terrain (habitats herbeux) à l’aide d’un dispositif d’aspiration par succion Note de bas de page2
ISO (1999)
F. candida (Willem, 1902)
OCDE (2005)
F. candida (Willem, 1902) Note de bas de page4
disponible dans le commerce
OCDE (2005)
F. fimetaria (Linné, 1758) Note de bas de page4
disponible dans le commerce

2. Récipients d’élevage et capacité

Document Type de récipient et dimensions Capacité quant au substrat d’élevage des collemboles
W & K (1998) F. candida et I. viridis récipient en PerspexNote de bas de page a de 28 × 16 × 9 cm 1 cm de substrat d’élevage humecté avec de l’eau distillée
W & K (1998) F. fimetaria boîtes de Petri de 90 × 13 mm 0,5 cm de substrat d’élevage
ISO (1999) récipients en plastique du commerce de 400 mL, fermés hermétiquement 1 cm de substrat d’élevage mouillé avec de l’eau désionisée presque à saturation
OCDE (2005) boîtes de Petri de 90 × 13 mm 0,5 cm de substrat d’élevage

3. Température et éclairage pendant l’élevage

Document Température (ºC) Conditions d’éclairageNote de bas de page b Humidité
W & K (1998) F. candida et I. viridis 15 ± 0,5Note de bas de page c 16 h C/8 h O; <1000 lux n.i.Note de bas de page d, Note de bas de page e
W & K (1998) F. fimetaria 20 ± 1 12 h C/12 h O n.i.
ISO (1999) 20-22 éclairage continu; 400-800 luxNote de bas de page f HRNote de bas de page g : 70-80 %
OCDE (2005) 20 ± 1 ou 20 ± 0,5 12 h C/12 h O ou 16 h C/8 h O; <1000 luxNote de bas de page h n.i.

4. Substrat d’élevage

Document Substrat d’élevage pH Conditions de renouvellement
W & K (1998) F. candida et I. viridis plâtre de Paris et charbon, hydratéNote de bas de pageI n.i.Note de bas de pageJ transférer périodiquement les élevages de réserve dans du plâtre de Paris frais (p. ex., tous les 2-3 mois)
W & K (1998) F. fimetaria plâtre de Paris et charbon, hydratéNote de bas de pageI n.i. transférer les élevages dans des boîtes de reproduction fraîches toutes les 4-8 semaines
ISO (1999) mélange 8/1 de plâtre de Paris et de charbon actif, hydratéNote de bas de pageKNote de bas de pageL 6,0-7,0 transférer les élevages dans des boîtes de reproduction fraîches après 8 semainesNote de bas de pageM
OCDE (2005) plâtre de Paris et charbon actifNote de bas de pageN n.i. transférer les élevages dans des boîtes de reproduction fraîches toutes les 4-8 semainesNote de bas de pageONote de bas de pageP

5. Alimentation pendant l’élevage

Document Nourriture utilisée Quantité et mode d’alimentation Fréquence de la distribution de nourriture
W & K (1998) F. candida et I. viridis levure sèche de boulangerNote de bas de pageQNote de bas de pageR 10-30 mg déposés sur des disques en papier filtre ≥1-2 fois par semaine
W & K (1998) F. fimetaria levure sèche de boulangerNote de bas de pageQ 15 mg 1 fois par semaine
ISO (1999) levure sèche granulée petites quantités à intervalles fréquents ≥1-2 fois par semaine
OCDE (2005) levure sèche granulée de boulanger 10-30 mg ou poids requis 1-2 fois par semaine

6. Entretien des élevages et rythme de développement

Document
Entretien des élevages synchrones
W & K (1998) F. candida
transférer plusieurs centaines de collemboles adultes des élevages de réserve dans des boîtes d’élevage fraîches, et déposer de la levure de boulanger; retirer les adultes après 24-48 h; laisser incuber les œufs à 15 ºC (ou 20 ºC, selon les besoins); observer quotidiennement et consigner la date d’éclosion; nourrir
W & K (1998) I. viridis
préparer des tubes d’éclosion (2,5 × 5 cm) contenant une couche de substrat d’élevage de 1 cm d’épaisseur; transférer des grappes d’œufs des élevages de réserve dans les tubes à l’aide d’un pinceau fin humecté; laisser incuber les œufs à 15 ºC (ou 20 ºC, selon les besoins); observer quotidiennement; passer un pinceau trempé dans l’eau distillée sur les œufs présentant une contamination fongique; transférer les collemboles qui viennent d’éclore dans un bocal à couvercle vissé (capacité de 120 mL) contenant 1 cm d’épaisseur de substrat d’élevage; nourrir
F. fimetaria
transférer 150-300 adultes d’un substrat vieux de 4-8 semaines dans des boîtes d’élevage fraîches et nourrir; au bout de 9 jours, prélever délicatement des œufs à l’aide d’une aiguille et d’une spatule et les déposer sur un papier d’éclosion (petit morceau de papier filtre trempé dans du substrat d’élevage); placer le papier d’éclosion dans une boîte d’élevage fraîche et maintenir l’humidité; la plupart des œufs écloront au bout de 3 jours; retirer le papier à éclosion de la boîte de Petri pour obtenir des élevages synchrones; nourrir
ISO (1999)
éviter le surpeuplement Note de bas de page5 ; à l’aide d’une fine spatule ou d’un pinceau fin, transférer les grappes d’œufs Note de bas de page6  des boîtes d’élevage sur un substrat d’élevage fraîchement préparé; au bout de 48 h, retirer les grappes d’œufs et nourrir les larves qui ont émergé des œufs Note de bas de page7
OCDE (2005) F. candida
transférer plusieurs centaines d’adultes des élevages de réserve dans des boîtes d’élevage fraîches contenant une couche de substrat de 1 cm d’épaisseur et déposer de la levure de boulanger; retirer les adultes au bout de 24-48 h; observer quotidiennement et consigner la date d’éclosion; nourrir
OCDE (2005) F. fimetaria
transférer de 150-300 adultes d’un substrat vieux de 4-8 semaines dans des boîtes d’élevage fraîches contenant une couche de substrat d’élevage de 0,5 cm d’épaisseur et nourrir avec 15 mg de levure de boulanger; au bout de 9 jours, prélever délicatement des œufs à l’aide d’une aiguille et d’une spatule et les déposer sur un papier d’éclosion (petit morceau de papier filtre trempé dans du substrat d’élevage); placer le papier d’éclosion dans une boîte d’élevage fraîche et maintenir l’humidité; la plupart des œufs écloront au bout de 3 jours; retirer le papier à éclosion de la boîte de Petri pour obtenir des élevages synchrones; nourrir

7. Indices de santé et d’acceptabilité des élevages; âge des collemboles utilisés dans les essais de toxicité; transfert des organismes dans les récipients d’essai

Document Indices de santé et d’acceptabilité des élevages Âge des collemboles utilisés dans les essais de toxicité Transfert des collemboles dans les récipients d’essai
W & K (1998) F. candida n.i.Note de bas de pageS juvéniles âgés de 10-12 jours aspirateur à air portable
W & K (1998) I. viridis n.i. juvéniles âgés de 5-7 jours  
W & K (1998) F. fimetaria n.i. organismes âgés de 23-26 jours  
ISO (1999) n.i. juvéniles âgés de 10-12 jours en tapotant le récipient ou à l’aide d’un exhausteurNote de bas de pageT
OCDE (2005) n.i. adultes appareil d’aspiration à flux d’air à faible succion
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