Méthode d’essai biologique : essais toxicologiques sur des truites arc-en-ciel aux premiers stades de leur cycle biologique : chapitre 8
Section 8 : Rapports à produire
Le procès-verbal de chaque essai doit mentionner tout écart par rapport aux exigences exposées dans les sections 2 à 7 de la présente méthode et, le cas échéant, fournir des précisions. Le lecteur doit pouvoir établir si les conditions et les modes opératoires expérimentaux et préalables ont rendu les résultats valides et acceptables pour l’usage qu’on entend en faire.
Le § 8.1 énumère les renseignements à intégrer dans le procès-verbal de l’essai ; le § 8.2, ceux à soit intégrer dans le procès- verbal de l’essai, soit communiquer séparément dans un rapport général, soit archiver pour au moins cinq années. Des programmes de surveillance ou des protocoles expérimentaux connexes pourraient exiger de faire figurer dans le procès-verbal certains des renseignements énumérés dans le § 8.2 ou de les reléguer à l’archivage (p. ex. des précisions sur les substances d’essai ou les modes opératoires et conditions précis ayant coïncidé avec le prélèvement des échantillons, leur manutention, leur transport et leur entreposage).
À l’égard de certains modes opératoires et conditions communs à une série d’essais courants (p. ex. les essais toxicologiques systématiques de surveillance ou de contrôle de la conformité aux règlements), correspondant aux exigences énoncées dans le présent document, on peut renvoyer à un rapport général ou joindre ce dernier. Dans ce rapport, on expose dans ses grandes lignes la pratique ordinairement suivie en laboratoire.
On doit archiver au laboratoire, pour au moins cinq ans, les précisions se rapportant à la réalisation et aux constatations de l’essai, qui ne sont pas reproduites dans le procès-verbal ni dans le rapport général, de sorte que l’on peut fournir l’information convenable si l’essai doit faire l’objet d’une vérification (audit). L’information archivée devrait comprendre les éléments suivants :
- L’enregistrement de la chaîne de transmission des échantillons analysés dans un dessein de surveillance ou de réglementation ;
- Copie du dossier d’acquisition de l’échantillon ou des échantillons ;
- Les résultats d’analyses chimiques de l’échantillon ou des échantillons ;
- Les notes d’observations et de mesures en laboratoire prises au cours de l’essai ;
- Les notes de laboratoire et les cartes de contrôle portant sur les essais toxicologiques de référence ;
- Les dossiers détaillés concernant l’origine des géniteurs et leur état de santé ;
- Toute l’information pertinente sur les méthodes utilisées pour provoquer l’expulsion des gamètes, sur leur manutention, leur conditionnement et leur entreposage ainsi que sur le processus ultérieur de fécondation ;
- Des renseignements sur l’étalonnage de l’équipement et des instruments.
Le personnel de laboratoire effectuant les essais devrait signer ou parafer l’original des feuilles de données.
8.1 Exigences minimales pour le procès-verbal de l’essai
Voici la liste des renseignements que l’on doit intégrer dans chaque procès-verbal de l’essai.
8.1.1 Substance d’essai
- Une courte description du type d’échantillon (p. ex. produit chimique, effluent, élutriat, lixiviat ou eau réceptrice) dans la forme où on l’a communiquée, le cas échéant, au personnel de laboratoire ;
- Des renseignements sur l’étiquetage ou le codage de chaque échantillon ou sous-échantillon ;
- Les dates du prélèvement de chaque échantillon ou sous-échantillon ; la date et l’heure de sa réception au laboratoire ;
- Les dates ou les journées d’utilisation de chaque échantillon ou sous-échantillon au cours de l’essai ;
- Dans le cas d’un échantillon d’effluent ou de lixiviat, sa température ou, s’il existe de nombreux sous-échantillons, la température d’un seul de ces derniers, à sa réception au laboratoire ;
- Les mesures de l’OD et du pH de l’échantillon ou du sous-échantillon d’eau usée ou d’eau réceptrice, immédiatement avant sa préparation ou son emploi dans l’essai toxicologique ;
- La date de préparation de l’élutriat et la description de la marche suivie à cette fin ; les dates ou les journées au cours desquelles, dans un essai sur élutriat, on a utilisé des échantillons ou des sous-échantillons.
8.1.2 Organismes d’essai
- Le nom de l’espèce, y compris son nom vernaculaire ;
- L’origine des gamètes ou des géniteurs, le nombre de femelles et de mâles utilisés pour la fécondation ;
- Une courte description du mode opératoire utilisé pour vérifier la motilité des spermatozoïdes ;
- Une courte description (y compris des intervalles de temps) de la méthode utilisée pour la fécondation des gamètes ;
- Le laps de temps pris pour parachever la fécondation jusqu’à l’exposition de tous les groupes d’œufs aux solutions d’essai ;
- Tout aspect ou traitement inhabituels des gamètes ou des œufs, avant leur emploi dans l’essai.
8.1.3 Installations et appareillage
- Les nom et adresse du laboratoire d’essai ;
- Le nom de la personne ou des personnes ayant réalisé l’essai ;
- Une courte description des enceintes expérimentales et de l’appareillage connexe (p. ex. incubateurs ; pompes ou autres appareils, si l’essai était à renouvellement continu).
8.1.4 Eau témoin ou de dilution
- Les type(s) et origine(s) de l’eau utilisée comme eau témoin et eau de dilution ;
- Le type et la quantité de tout produit chimique ajouté à l’eau témoin ou de dilution.
8.1.5 Méthode d’essai
- Mention de la méthode d’essai biologique utilisée (c’est-à-dire conformément au présent document) ;
- Courtes mention et description des options choisies (p. ex. essai E, EA ou EAT ; renouvellement intermittent ou continu des solutions) ;
- Conception et description du mode opératoire, s’il est spécial (p. ex. renouvellement des solutions d’essai à d’autres intervalles que journaliers ; préparation et utilisation d’un élutriat ; préparation et utilisation d’un solvant et, le cas échéant, d’un témoin de ce dernier) ;
- Courte description des modes opératoires, dans les cas où on a filtré un échantillon, un sous-échantillon ou la solution d’essai ou on en a corrigé la dureté ou le pH ;
- Courte description de la fréquence et de la nature de toutes les observations et de toutes les mesures effectuées au cours de l’essai ;
- Nom du ou des programmes ainsi que des méthodes de calcul des paramètres de mesure statistiques et renvoi à ces programmes et méthodes.
8.1.6 Conditions expérimentales et modes opératoires
- Le pourquoi et la description de tout écart aux modes opératoires et aux conditions ou de toute exclusion de modes opératoires et de conditions exposés dans le présent document ;
- Le nombre de solutions d’essai, y compris les témoins et leur titre ; le volume et la profondeur de solutions dans chaque enceinte expérimentale ;
- Le nombre de sujets par enceinte expérimentale et le nombre de répétitions par concentration ;
- Une brève mention sur la présence ou l’absence d’aération, y compris d’aération préalable ; le cas échéant, le débit et la durée de l’aération de l’échantillon ou de solution d’essai, avant et pendant l’exposition des organismes ;
- Le mode et le débit de renouvellement des solutions d’essai, c’est-à-dire L/(g·j) ;
- Les dates du début et de la fin de l’essai ;
- Toutes les mesures exigées de la température, du pH et de l’OD (mg/L et pourcentage de saturation) dans l’échantillon et les solutions d’essai, y compris les témoins, avant et pendant l’essai.
8.1.7 Résultats
- Le nombre moyen et le pourcentage d’embryons non viables dans chaque répétition et à chaque concentration, y compris dans les témoins (essai E), 7 jours après la fécondation ; la CE 50 et ses limites de confiance à 95 % et la CE 25 ;
- Le nombre moyen et le pourcentage d’alevins non viables dans chaque répétition et à chaque concentration, y compris les témoins, 7 jours après la sortie de l’œuf de la moitié des sujets dans les groupes témoins (essai EA) ; la CE 50 et ses limites de confiance et la CE 25 ;
- Le nombre moyen et le pourcentage de sujets non viables au moment où la moitié des sujets des groupes témoins ont atteint le stade de la truitelle, dans chaque répétition et à chaque concentration, y compris dans les témoins (essai EAT) ; la CE 50 et ses limites de confiance et la CE 25 ;
- Le nombre de truitelles mortes à chaque concentration après 30 jours d’exposition avec alimentation et le nombre de truitelles au début de l’exposition (essai EAT) ; la CL 50 et ses limites de confiance ;
- Le poids sec moyen des truitelles ayant survécu à l’exposition de 30 jours, avec alimentation, dans chaque répétition et à chaque concentration (essai EAT) ; la CI 25 et ses limites de confiance à 95 % ;
- Un ou des comptes rendus descriptifs sur les retards de l’éclosion et les difformités chez les alevins à chaque concentration (essai EA) ; la description de tout écart apparent au témoin ;
- Un ou des comptes rendus descriptifs sur les alevins difformes, le retard pour parvenir au stade de la truitelle et le comportement anormal des truitelles à chaque concentration (essai EAT) ; la description de tout écart apparent au témoin ;
- Les résultats des essais E effectués avec un ou des toxiques de référence, parallèlement, ainsi que la moyenne géométrique (± 2 σ) pour les mêmes toxiques de référence, obtenus dans le laboratoire, à la faveur des essais antérieurs ;
- Tout phénomène inhabituel relatif à l’essai, tout écart aux modes opératoires décrits dans le présent rapport, tout problème observé, toute mesure prise pour y remédier.
8.2 Exigences supplémentaires
Voici la liste des renseignements qu’il faut soit faire figurer dans le procès-verbal de l’essai, soit dans le rapport général ou, encore qu’il faut archiver pour au moins cinq années.
8.2.1 Substance d’essai
- Le nom des préleveurs ou des fournisseurs des échantillons ou de sous- échantillons ;
- La chaîne de transmission et les fiches d’inscription des échantillons ou des sous-échantillons ;
- L’état (p. ex. température, obscurité, récipient scellé) dans lequel se trouvaient les échantillons ou les sous-échantillons à leur réception et pendant leur entreposage.
8.2.2 Organismes d’essai
- Les antécédents des géniteurs (p. ex. fécondité ; dossiers des maladies observées et de leur traitement) ;
- Le mode opératoire du prélèvement des gamètes et les observations faites au cours de l’opération (p. ex. degré de maturité des femelles ; motilité du sperme) ;
- Les conditions dans lesquelles ont été effectués le transport et l’entreposage des gamètes, la détermination de la motilité du sperme avant la fécondation, la fécondation même ainsi que les modes opératoires suivis et des détails des modalités de la fécondation.
8.2.3 Installations et appareillage expérimentaux
- La description des systèmes de régulation de l’éclairage et de la température dans l’installation ;
- La description du système d’aération et de régulation de l’aération des enceintes expérimentales ;
- La description détaillée ou la représentation graphique des enceintes expérimentales et de l’appareillage connexe (p. ex. taille, forme, type de matériau, conception) ;
- La description des modalités de nettoyage ou de rinçage de l’appareillage.
8.2.4 Eau témoin ou de dilution
- Des précisions sur le prélèvement d’échantillon et l’entreposage, si l’eau témoin ou l’eau de dilution était une eau réceptrice d’amont ;
- Des précisions sur tout traitement préalable que l’on a fait subir à l’eau (p. ex. filtration, stérilisation, chloration et déchloration, réglage de la température, dégazage, aération) ;
- Les variables connexes de la qualité de l’eau (p. ex. métaux en dissolution, ammoniaque, pesticides, matières en suspension, acides humiques et fulviques) mesurées avant et/ou pendant l’essai toxicologique.
8.2.5 Méthode expérimentale
- Description de l’expérience que possède le laboratoire à l’égard de l’option choisie et des modes opératoires connexes décrits dans le présent document ;
- Le mode opératoire ayant servi à la préparation et à l’entreposage des solutions mères ainsi que des solutions filles de produits chimiques, description et concentration(s) de tout solvant utilisé ;
- Les méthodes utilisées pour l’analyse chimique des solutions d’essai ou de l’échantillon, avec renvois ; précision concernant le prélèvement, la préparation des échantillons et leur entreposage, préalablement à l’analyse chimique ;
- L’utilisation et la description des essais préliminaires et des essais visant à déterminer les intervalles de manifestation de la toxicité.
8.2.6 Conditions expérimentales et modes opératoires
- La photopériode, la source d’éclairage et l’intensité de ce dernier à la surface des solutions d’essai ;
- La description de l’éclaircissage des truitelles avant le début de la deuxième étape de l’essai EAT (méthode, nombres, moment) ;
- La description de la source de nourriture, de son type et de la ration (quantité et fréquence des repas) distribuée aux truitelles durant l’essai EAT ;
- Toute autre caractérisation chimique effectuée sur l’échantillon, les solutions mères et les solutions d’essai (p. ex. concentration de substance chimique, teneur en matières en suspension, conductivité, dureté et alcalinité), avant et/ou pendant l’essai ;
- L’aspect de l’échantillon ou des solutions d’essai ; changements d’aspect observés au cours de l’essai ;
- Les conditions et modes opératoires de la mesure de la CE 50 des toxiques ou du toxique de référence utilisés dans l’essai E.
8.2.7 Résultats
- Les observations et les données numériques supplémentaires étayant les comptes rendus descriptifs des effets observés au cours de l’essai EA ou EAT, pour lesquels il n’existe aucune observation formelle (v. § 4.4 et 8.1.7), y compris l’information relative : à la proportion d’embryons non viables (essais EA et EAT) ; à l’éclosion retardée (essais EA et EAT) ; à la mortalité des alevins après l’éclosion (essais EA et EAT) ; aux alevins difformes (essais EA et EAT) ; à l’accession retardée au stade de la truitelle (essai EAT) ; le comportement anormal des truitelles (essai EAT) ;
- Les résultats des essais visant à établir la gamme des concentrations significatives (le cas échéant) ;
- Les cartes de contrôle présentant les résultats les plus récents et les antécédents des essais toxicologiques effectués avec le ou les toxiques de référence ;
- La présentation graphique des données ;
- Les résultats des essais de la létalité aiguë effectués en parallèle avec des truitelles ou de jeunes arcs-en-ciel et une partie de l’échantillon ou des solutions d’essai.
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