Information sur des aliments nouveaux: Ananas de lignée EF2-114
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Contexte :
Santé Canada a avisé Del Monte Fresh Produce Company (Del Monte) qu'il n'avait aucune objection à l'utilisation de l'ananas de lignée EF2-114 comme aliment destiné à la consommation humaine. Le Ministère a effectué une évaluation exhaustive de cette variété d'ananas conformément à ses Lignes directrices sur l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux. Ces lignes directrices sont fondées sur des principes reconnus à l'échelle internationale pour établir l'innocuité des aliments à caractères nouveaux.
Le texte qui suit résume l'avis initial remis par Del Monte ainsi que l'évaluation réalisée par Santé Canada. Il ne contient aucun renseignement commercial confidentiel.
1. Introduction
Del Monte a mis au point une variété de Ananas comosus (L.) Merr. var. comosus, famille des Bromeliaceae (ananas) génétiquement modifiée qui présente une chair de couleur rose grâce à l'expression accrue du gène correspondant au lycopène.
La lignée EF2-114 a été mise au point grâce à l'introduction de plusieurs constructions d'expression génétique, certaines pour l'expression d'enzymes d'autres espèces végétales (gène PSY de la tangerine pour la biosynthèse du lycopène; SuRBHra (ALS) du tabac pour la sélection de transformants basée sur la tolérance aux herbicides), et d'autres pour l'atténuation de l'expression génétique endogène à l'aide de l'ARNi (bLcy et eLcy pour la conversion du lycopène en d'autres caroténoïdes; flACC3′ pour la biosynthèse de l'éthylène).
L'évaluation de l'innocuité effectuée par les évaluateurs de la Direction des aliments a été réalisée conformément aux Lignes directrices pour l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux de Santé Canada. Ces dernières sont fondées sur les démarches visant l'harmonisation avec les directives établies par d'autres autorités réglementaires et reflètent les documents d'orientation internationaux dans ce domaine (p. ex., le Codex Alimentarius). L'évaluation a tenu compte de la façon dont cette variété d'ananas a été créée, de la composition et de la qualité nutritionnelle de cette variété par rapport aux variétés d'ananas non modifiées et de la possibilité que cette variété d'ananas soit toxique ou cause des réactions allergiques. Del Monte a fourni des données démontrant que la lignée EF2-114 est tout aussi inoffensive et de même qualité nutritionnelle que les variétés d'ananas traditionnelles utilisées à des fins alimentaires au Canada.
La Direction des aliments est chargée par la loi de l'évaluation préalable à la mise en marché des aliments nouveaux et des ingrédients alimentaires nouveaux, comme le précise le Règlement sur les aliments et drogues (Titre B.28). La lignée EF2-114 est considérée comme un aliment nouveau dans la partie suivante de la définition des aliments nouveaux :
« c) aliment dérivé d'un végétal, d'un animal ou d'un micro-organisme qui, ayant été modifié génétiquement, selon le cas :
- (i) présente des caractères qui n'avaient pas été observés auparavant. »
2. Mise au point de la plante modifiée
Le pétitionnaire a fourni des renseignements décrivant les méthodes utilisées pour mettre au point la lignée EF2-114 et les données de biologie moléculaire qui caractérisent le changement génétique, lequel entraîne la coloration de la chair en rose par suite de l'expression accrue du gène correspondant au lycopène.
La lignée EF2-114 a été mise au point grâce à la transformation de la variété d'ananas MD2 médiée par Agrobacterium avec deux vecteurs de transformation différents : pHCW.T-2 et pHCWflACC3′-2.
Le vecteur pHCW.T-7 contient une construction (ADN-T) du gène PSY, codant une phytoène synthase (PSY) provenant de la tangerine (Citrus reticulata). Cette enzyme catalyse la synthèse du phytoène, un intermédiaire dans la voie de la biosynthèse du lycopène. Le vecteur pHCW.T-7 contient également deux constructions d'ARNi basées sur la séquence de deux gènes endogènes, bLcy et eLcy. Lorsqu'elles sont transcrites, ces constructions d'ARNi réduisent l'expression d'une lycopène bêta-cyclase et d'une lycopène epsilon-cyclase, respectivement, qui interviennent dans le catabolisme du lycopène. L'expression de la protéine PSY et les deux constructions d'ARNi visent à promouvoir l'accumulation de lycopène dans la portion comestible du fruit.
Le vecteur pHCWflACC3′-2 contient une autre construction d'ARNi conçue pour réduire l'expression de la 1-aminocyclopropane-1-acide carboxylique synthase (ACS) endogène, une enzyme intervenant dans la biosynthèse de l'éthylène. On a cherché à réduire l'expression de cette enzyme dans le but de promouvoir l'uniformité de la floraison et de la production de fruits. Cependant, la caractérisation moléculaire et phénotypique de l'ananas de lignée EF2-114 a révélé qu'aucune insertion intacte de cette construction n'était présente, ce qui a entraîné une expression insuffisante de cette construction d'ARNi dans la lignée EF2-114. Par conséquent, on n'a pas obtenu le phénotype de l'uniformité pour la lignée EF2-114.
Les deux vecteurs codent également un gène marqueur sélectionnable du tabac (Nicotiana tabacum), SuRBHra, qui exprime une acétolactate synthase (ALS). Ce gène a été employé dans le seul but de sélectionner des transformants efficaces pendant le processus de développement. L'ALS confère une tolérance aux herbicides à base de sulfonylurée.
Enfin, les cassettes d'expression pour les constructions d'ARNi pour bLcy, eLcy et flACC3′ comprennent chacune un intron LS1 de la pomme de terre (Solanum tuberosum). Le but de cet élément est d'assurer la stabilité des structures répétées inverses des constructions d'ARNi, nécessaires à l'engagement efficace de la machinerie ARNi de la plante. Aucun gène de pomme de terre exprimant une protéine n'est présent dans la lignée EF2-114.
Le pétitionnaire a fourni des renseignements à l'appui de l'innocuité et de l'utilisation de longue date des organismes donneurs (A. comosus var. comosus, C. reticulata et S. tuberosum) et de l'organisme receveur (A. comosus var. comosus). Aucun de ces organismes ne pose de problème sur le plan de la salubrité des aliments. Dans le cas de N. tabacum, l'enzyme ALS n'est pas reliée à la voie de biosynthèse de la nicotine et a été évaluée pour sa similarité avec des toxines et des allergènes connus.
3. Caractérisation de la plante modifiée
Le nombre d'inserts d'ADN-T dans l'ananas de lignée EF2-114 a été caractérisé par l'utilisation combinée du transfert de Southern et d'une analyse basée sur la réaction de polymérisation en chaîne moléculaire (PCR), la PCR asymétrique thermique entrelacée (TAIL-PCR). Les résultats des analyses ont démontré qu'il existe de multiples sites d'intégration dans la lignée EF2-114. Une comparaison des données entre le transfert de Southern et les analyses TAIL-PCR a confirmé la présence d'au moins une (1) copie intacte de la construction d'ADN-T pHWC.7-2, d'une copie tronquée de la construction d'ADN-T pHWCflACC3′-2 et d'autres copies complètes et/ou partielles de chaque construction d'ADN-T (éléments spécifiques à pHCW.T-7 : quatre copies de la région de codage PSY; deux copies complètes et deux copies partielles de bLcy; éléments présents dans les deux cassettes plasmidiques : région ALS-ALS3' qui couvre SuRBHra : quatre copies associées à la cassette pHCW.T-7; deux copies associées à pHCW-flACC3′, une copie partielle supplémentaire) dans le génome de l'ananas. La sécurité des cadres de lecture ouverts potentiels (ORF) générés par ces séquences supplémentaires a été analysée plus en détail. Aucune séquence de squelette vectoriel n'a été détectée dans la lignée EF2-114.
Compte tenu du grand nombre de copies réarrangées des inserts d'ADN-T dans la lignée EF2-114, le pétitionnaire a effectué une analyse au niveau de la séquence des régions des bordures gauche et droite. L'objectif était de déterminer s'il y avait une corrélation entre ces séquences et le nombre d'intégrations observées dans les données obtenues avec le transfert de Southern. Cette approche a également été utilisée pour prédire et caractériser le risque potentiel que toute nouvelle séquence de codage ou tout nouveau ORF non intentionnel constitue un allergène ou une toxine.
On a utilisé le logiciel ORF Finder de NCBI pour analyser les séquences de la bordure gauche (BG) et de la bordure droite (BD) des sites d'intégration au moyen de l'analyse TAIL-PCR afin de rechercher de nouvelles protéines ou de nouveaux peptides possibles. L'analyse de la bordure gauche a permis de découvrir des ORF de l'ordre de 38 à 63 acides aminés. Les ORF découverts dans les séquences de la BD variaient de 35 à 110 acides aminés de longueur. Aucune de ces séquences ne présentait une identité supérieure à 35 % à l'une quelconque des séquences contenues dans les bases de données de NCBI. Les ORF prédits ont ensuite été examinés plus à fond pour déterminer s'ils présentaient une similarité avec des allergènes et toxines connus. La première méthode consistait à restreindre les résultats de l'outil de recherche BLASTP en utilisant les mots-clés « allergène » ou « toxine ». Ces recherches n'ont donné aucun résultat.
La deuxième méthode consistait à effectuer une recherche dans les bases de données FAARP AllergenOnline de l'université du Nebraska en utilisant les paramètres par défaut. En utilisant l'algorithme FASTA3.04 dans le cadre d'une recherche par balayage de 80 résidus, on a trouvé deux ORF de longueur supérieure à 80 acides aminés, un de 97 et un de 110 acides aminés de longueur. Les autres résultats étaient inférieurs à 80 acides aminés. Les deux plus grands ORF ont été analysés, et aucun d'entre eux ne montrait une identité supérieure à 35 % ou plus de 80 acides aminés aux allergènes connus de la base de données FAARP. Une recherche effectuée à l'aide d'une fenêtre de balayage de 8 acides aminés n'a pas non plus permis de trouver des correspondances d'identité supérieures à 35 % avec les chaînes de séquence stockées dans cette base de données.
La stabilité des inserts d'ADN-T dans le génome de la lignée EF2-114 a été démontrée par l'évaluation de plantes individuelles issues de quatre générations. À partir de la plante initiale transformée et régénérée (T0), trois générations successives ont été cultivées par propagation clonale (T1, T2, T3) et testées, tout comme un échantillon de culture tissulaire produit à partir de la génération T1 (T1-TC). Toutes les générations ont été analysées au moyen du transfert de Southern. Les résultats indiquent que les inserts d'ADN-T (y compris les séquences partielles) sont intacts et stables sur les quatre générations de la lignée EF2-114.
On a également évalué la stabilité générationnelle au niveau phénotypique en observant la couleur des fruits sur cinq générations cultivées par propagation clonale successive (T1, T2, T3, T4, T5) ainsi que l'échantillon de culture tissulaire décrit ci-dessus (T1-TC). Les fruits matures de l'ananas témoin MD2 non transformé étaient de couleur dorée. Les fruits des plantes contenant l'événement de transformation avaient une chair rose en raison de l'accumulation de lycopène. Les coupes transversales des fruits de chaque génération ont montré une uniformité de couleur entre les différentes générations.
4. Information sur le produit
L'ananas de la lignée EF2-114 diffère de ses homologues traditionnels par l'ajout de plusieurs constructions d'expression génique, certaines pour l'expression d'enzymes d'autres espèces végétales (gène PSY de la tangerine pour la biosynthèse du lycopène; SuRBHra (ALS) du tabac pour la sélection de transformants en fonction de la tolérance aux herbicides), et d'autres pour le silençage de l'expression génique endogène en utilisant l'ARNi (bLcy et eLcy pour la conversion du lycopène en d'autres caroténoïdes; flACC3′ pour la biosynthèse de l'éthylène).
En ce qui concerne les niveaux d'expression des protéines PSY et SuRBHra, le pétitionnaire a expliqué que l'extraction des protéines et des acides nucléiques du tissu d'ananas est extrêmement difficile. Cela est principalement attribuable aux faibles concentrations existant dans les fruits frais, à la forte activité des protéases et des nucléases et aux niveaux élevés de composés interférents comme les polyphénols et les polysaccharides (Song et coll., 2006Note de bas de page 1).
Afin de produire des quantités suffisantes de protéines PSY et SuRBHra pour effectuer d'autres études d'innocuité recommandées par les directives du Codex, le pétitionnaire a tenté d'obtenir une « surexpression » des gènes à l'aide d'un système d'expression élaboré avec Escherichia coli. Malheureusement, la protéine PSY n'a pas réussi à s'exprimer dans ce système, tandis que la protéine SuRBHra était localisée exclusivement dans les corps d'inclusion dans les cellules d'E. coli, ce qui exigeait des conditions de purification difficiles qui ne convenaient pas à des analyses in vitro de digestibilité, de stabilité à la chaleur ou de toxicité aiguë (c.-à-d. que de telles conditions de purification ont dénaturé considérablement SuRBHra).
Le pétitionnaire a plutôt choisi d'utiliser la PCR par transcription inverse quantitative en temps réel (qRT-PCR) pour mesurer les niveaux de transcription de l'ARN de PSY et de SuRBHra, ainsi que des gènes ciblés par le silençage au moyen de l'ARNi, soit bLcy, eLcy et flACC3′. La qRT-PCR exige des quantités d'ARN modèle de l'ordre du nanogramme et utilise des molécules de colorant fluorescent émettrices pour surveiller les produits d'amplification pendant chaque cycle de la réaction PCR. Contrairement au transfert de Northern, la qRT-PCR n'exige pas de manipulation postérieure de l'ARN, ce qui en fait une méthode plus précise pour comparer les niveaux d'expression génétique.
Le pétitionnaire a signalé que l'expression du gène PSY de la tangerine n'avait pas été détectée dans l'ananas de la lignée EF2-114 par la qRT-PCR, ce qui signifie que le niveau d'expression était inférieur à la limite de détection (LD). On a laissé entendre qu'un certain processus de régulation interne pourrait empêcher l'expression d'un gène PSY exogène, mais le mécanisme précis n'a pas été étudié. L'expression des gènes de la phytoène synthase endogène UT1 et UT2 a été détectée par qRT-PCR. Le niveau d'expression de l'ARN de SuRBHra s'est avéré très faible; cependant, il semblait suffisant pour conférer la tolérance aux herbicides et permettre la sélection pendant le processus de transformation.
Il a également été démontré au moyen de la qRT-PCR que le niveau d'expression des gènes bLcy et eLcy a été réduit avec succès dans la lignée EF2-114 par rapport au témoin non modifié (MD2). On a suggéré que l'expression des gènes endogènes de la phytoène synthase, ainsi que la réduction de l'expression des gènes bLcy et eLcy ont contribué au phénotype observé dans la lignée EF2-114, caractérisé par un tissu coloré en rose.
Étant donné la présence de seulement une copie partielle de la construction d'ARNi conçue pour réduire l'expression du gène flACC3′ dans le génome de la lignée EF2-114 ainsi que l'absence du phénotype désiré d'uniformité de la floraison, on s'attendait à ce que les niveaux de transcription de flACC3′ soient comparables dans la lignée EF2-114 et le témoin non modifié (MD2). L'analyse qRT-PCR n'a toutefois pas permis de détecter ou de quantifier de façon fiable la transcription du gène flACC3′ dans la lignée EF2-114 ou la lignée parentale d'ananas MD2.
5. Exposition alimentaire
On s'attend à ce que la lignée EF2-114 (qui sera commercialisé sous le nom d'ananas PinkGlowMC) soit consommé de la même façon que l'ananas de la lignée parentale MD2 actuellement vendu sur le marché canadien. Le pétitionnaire ne prévoit pas de changement important dans la consommation de l'ananas par suite de l'introduction de la lignée EF2-114.
6. Nutrition
Des comparaisons d'éléments nutritifs ont été effectuées sur des fruits récoltés dans une seule région à la Corporación de Desarrollo Agrícola Del Monte (CDADM), à Buenos Aires, au Costa Rica. Les plantes étaient cultivées et entretenues selon les pratiques agricoles normalisées. Des semis de 15 à 20 semaines cultivés en serre ont été transplantés suivant un plan en blocs aléatoires complets avec trois répétitions et des nombres inégaux, comprenant un total de 2 541 plantes de la lignée EF2-114 (606+1 477+458) et 145 plantes MD2 (25+61+59). Un an plus tard, les plantes expérimentales et témoins ont été forcées de fleurir et de produire des fruits.
Aux Laboratoires de recherche ABC, à Gainesville, en Floride, 18 fruits des lignées EF2-114 et MD2 ont été choisis au hasard pour les analyses de la composition. Les autres fruits ont été conservés pour d'autres analyses. Des analyses de la composition pour un total de 19 analytes ont été effectuées pour comparer les niveaux d'éléments nutritifs dans les fruits expérimentaux et témoins. L'analyse portait sur les macronutriments (cendres, glucides, humidité, protéines et matières grasses), les fibres alimentaires, les acides aminés (leucine, isoleucine, méthionine et valine), les caroténoïdes (lycopène, bêta-carotène, alpha-carotène et lutéine), les sucres (saccharose, fructose et glucose), la vitamine C et le potassium. Toutes les analyses ont été effectuées à l'aide de la méthode d'essai de l'AOAC ou d'autres méthodes acceptables.
Les données ont été analysées à l'aide du logiciel InfoStat-Statistical. On a effectué un test de Student pour comparer les niveaux d'éléments nutritifs des ananas de lignée EF2-114 et MD2 à un niveau de signification de P < 0,05.
Comme prévu, le lycopène (un caroténoïde) s'est accumulé dans le fruit de la lignée EF2-114 et a entraîné la production de chair rose/rouge. La concentration de lycopène dans les fruits de la lignée EF2-114 variait entre 14,3 et 32,9 ppm (moyenne de 21,3 ppm). La concentration de lycopène dans la lignée EF2-114 se situait dans la fourchette du lycopène produit dans d'autres aliments ayant des antécédents d'utilisation sécuritaire. Par exemple, les concentrations de lycopène sont de 26 ppm pour la tomate et de 45 ppm pour le melon d'eau.
La valeur moyenne du bêta-carotène (pro-vitamine A) dans la lignée EF2-114 était de 5,3 g/100 g, ce qui est nettement inférieur à la valeur moyenne déclarée pour la variété MD2 (16,8 µ/100 g). Cet effet est prévisible puisque la conversion du lycopène en bêta-carotène est réduite par la suppression du lycopène bLcy. Il convient de noter que l'ananas n'est pas une source importante de bêta-carotène; la teneur en bêta-carotène de la patate douce, de la carotte et du cantaloup est de 9 444, 8 285 et 2 020 g/100 g, respectivement.
La concentration de potassium était beaucoup plus élevée dans la lignée EF2-114 (156 mg/100 g) que dans la variété MD2 (129 mg/100 g). Il a également été noté que la variation individuelle de la teneur en potassium était généralement élevée pour les deux variétés; cependant, la fourchette pour la lignée EF2-114 était relativement plus élevée que pour la MD2. La variation observée dans la teneur en potassium des lignées EF2-114 et MD2 peut être due à des facteurs environnementaux. L'expérience acquise avec d'autres cultures indique qu'il existe une corrélation positive entre la teneur en lycopène et la teneur en potassium du fruit. Une étude publiée mentionne que la concentration de potassium dans les fruits de la tomate ′Fla.8153′ à teneur élevée en lycopène était fortement corrélée (P < 0,01) avec celle des caroténoïdes, ce qui indique un rôle possible du potassium dans l'augmentation du lycopène et la réduction du bêta-carotène dans le fruit.
La vitamine C est un élément nutritif important de l'ananas. Les résultats de l'analyse ont montré que la valeur moyenne de cette vitamine pour la lignée EF2-114 (40,3 mg/100 g) était relativement plus basse que pour la MD2 (46,8 mg/100 g). Toutefois, les différences étaient faibles et les valeurs moyennes se situaient dans la plage des valeurs déclarées pour le témoin (MD2).
Les niveaux de tous les autres nutriments analysés dans la lignée EF2-114 se situaient dans les plages normalement observées dans les variétés d'ananas produites commercialement.
Les apports potentiels en éléments nutritifs ont été calculés par le pétitionnaire à l'aide des données sur la consommation alimentaire recueillies dans What We Eat in America (WWEIA), la partie des entrevues alimentaires de la National Health and Nutrition Examination Survey (NHANES) provenant des années d'enquête 2003-2010 et des données sur la composition en éléments nutritifs du département de l'Agriculture des États-Unis (USDA) et de Del Monte.
Pour l'absorption potentielle d'éléments nutritifs modélisée par le pétitionnaire et fondée sur un scénario où la lignée EF2-114 est substituée à tous les ananas consommés au Canada, l'effet sur l'apport total de lycopène serait très faible. Malgré les différences observées dans la concentration de bêta-carotène, de vitamine C et de potassium, la composition en éléments nutritifs se situe dans la fourchette de la variation naturelle du MD2, et les changements potentiels dans l'apport alimentaire de ces éléments nutritifs provenant de l'ananas seraient négligeables dans le contexte de l'alimentation canadienne.
D'après les informations fournies sur la composition de la lignée EF2-114 et du témoin MD2, l'utilisation de l'ananas de lignée EF2-114 comme aliment au Canada ne pose aucun problème de sécurité du point de vue nutritionnel.
7. Chimie et toxicologie
Le pétitionnaire a fourni des preuves à l'appui de l'innocuité des deux nouvelles protéines, PSY et SuRBHra, et des trois nouvelles constructions d'ARNi pour supprimer les gènes endogènes bLcy, eLcy et flACC3′, exprimés dans l'ananas de la lignée EF2-114. Ces preuves comprenaient des antécédents d'utilisation alimentaire sécuritaire, les données bio-informatiques, les niveaux d'expression des gènes et l'exposition alimentaire.
La protéine PSY est une protéine endogène dans toutes les plantes. Le transgène PSY provient de la tangerine, un aliment d'usage courant. Par conséquent, la protéine PSY a des antécédents d'utilisation sécuritaire à des fins alimentaires et ne devrait pas poser de problème toxicologique.
Une analyse bio-informatique de la séquence des acides aminés pour la protéine PSY a été effectuée pour en comparer l'identité avec celle des toxines connues, à l'aide de la base de données NCBI Entrez protein (28 mars 2013). Des recherches ont également été menées sur les régions flanquantes des inserts, sur la base de protéines putatives provenant de cadres de lecture ouverts (ORF). Il n'y avait aucune similitude de séquence biologiquement pertinente avec les toxines connues.
La nouvelle protéine PSY n'a pas été détectée dans la lignée EF2-114, et les niveaux de transcription de PSY étaient inférieurs au seuil de détection (cycle seuil > 35 pour l'analyse PCR). La nouvelle protéine PSY est présente dans la lignée EF2-114 à des concentrations extrêmement faibles. Par conséquent, l'exposition à la nouvelle protéine PSY devrait être négligeable d'un point de vue toxicologique.
La protéine SuRBHra, aussi connue sous le nom d'acétolactate synthase (ALS), est une enzyme bien caractérisée chez les plantes. Le pétitionnaire a démontré que deux enzymes ALS modifiées approuvées par Santé Canada pour le soya et le maïs (GM-HRA, ZM-HRA) présentaient une forte similitude dans la séquence d'acides aminés avec la protéine SuRBHra. Les deux mutations de la protéine SuRBHra étaient les mêmes que celles des enzymes ALS approuvées. Les données probantes laissent entendre que la nouvelle protéine SuRBHra a des antécédents d'utilisation sécuritaire pour l'alimentation.
L'analyse bio-informatique de la séquence des acides aminés pour la protéine SuRBHra a été effectuée de la façon décrite pour la protéine PSY. Il n'y avait aucune similitude de séquence biologiquement pertinente avec les toxines connues.
L'expression des transcriptions de SuRBHra était détectable mais faible; cependant, la protéine SuRBHra n'a pas été détectée dans la lignée EF2-114. Le pétitionnaire a estimé une exposition alimentaire à la protéine SuRBHra en fonction de la limite de détection (LD = 12,5 ng) et en supposant une consommation d'ananas de 2 g par jour par habitant. L'exposition alimentaire estimée est égale ou inférieure à 0,0001875 mg de SuRBHra par jour. Cette quantité est négligeable d'un point de vue toxicologique.
Les nouvelles séquences de codage partiel de l'ARNi (bLcy, eLcy et flACC3′) sont dérivées de l'ananas. Une analyse bio-informatique du nouveau siARN putatif généré n'a révélé aucune correspondance pertinente avec les bases de données de produits de la transcription ou de génomes humains. Cette constatation indique que les effets hors cible sont peu probables et qu'une suppression génétique non intentionnelle ne devrait pas se produire.
En se fondant sur la forte consommation d'ananas signalée au Japon, le pétitionnaire a fourni une estimation alimentaire de l'exposition au nouveau siARN qui résulterait de la consommation d'ananas de lignée EF2-114. Le pétitionnaire a mesuré le siARN total dans la lignée EF2-114, puis calculé la quantité qui représenterait un unique siARN. L'exposition a été estimée à quatre copies de nouveau siARN par cellule hépatique pour la population générale. Cette valeur est bien en deçà du seuil déclaré de 100 copies de siARN ou plus par cellule qui, selon les estimations, influe sur la suppression d'un produit de la transcription ciblé. Le niveau de siARN nouveau exprimé dans la lignée EF2-114 est considéré comme suffisamment faible pour empêcher des suppressions involontaires dans le génome des cellules humaines.
Santé Canada a calculé l'exposition alimentaire à la teneur totale en siARN par organisme pour le corps humain adulte. Les estimations de l'exposition déterminées par le pétitionnaire et par la SETPMM sont prudentes et bien en deçà du seuil de préoccupation pour le siARN nouveau (100 copies/cellule). Pour cette raison, la présence de siARN nouveau dans l'ananas de la lignée EF2-114 n'est pas considérée comme une préoccupation en matière d'innocuité.
Le pétitionnaire et Santé Canada ont déterminé que le taux plus élevé de lycopène présent dans l'ananas de lignée EF2-114, comparativement à l'ananas conventionnel, n'est pas préoccupant sur le plan de la sécurité, parce qu'il se situe dans la fourchette des valeurs observées dans d'autres aliments ayant des antécédents d'utilisation sécuritaire. La concentration de lycopène dans la lignée EF2-114 est établie à 21,3 ppm en moyenne, comparativement à 26 ppm pour la tomate et 45 ppm pour le melon d'eau.
On a évalué les nouvelles protéines PSY et SuRBHra pour leur allergénicité potentielle en tenant compte des données de la bio-informatique, de la glycosylation protéique possible et de l'exposition alimentaire potentielle.
Une analyse bio-informatique des séquences d'acides aminés pour les protéines PSY et SuRBHra a été réalisée pour comparer l'identité globale de ces substances avec des allergènes connus ou putatifs. De plus, des fenêtres coulissantes de 80 et de 8-mer pour les correspondances ont été réalisées pour déterminer l'homologie significative et la présence d'épitopes allergéniques, respectivement. Les régions flanquantes des inserts ont également été examinées, à partir de protéines putatives et d'ORF. Des recherches ont été effectuées à l'aide d'AllergenOnline (version 15.0), le 12 janvier 2015, ainsi que de la base de données NCBI Entrez protein (20 janvier 2015). Les résultats n'ont révélé aucune correspondance avec des allergènes connus ou putatifs.
La glycosylation protéique est une caractéristique de certains allergènes. L'analyse des sites de glycosylation potentiels dans les protéines PSY et SuRBHra a démontré qu'aucune des deux protéines n'est fortement glycosylée. Cette constatation confirme que l'allergénicité de ces protéines est négligeable.
Les nouvelles protéines PSY et SuRBHra n'ont pas été détectées dans l'ananas de la lignée EF2-114 (LD = 12,5 ng). Ce résultat indique que l'exposition à ces nouvelles protéines devrait être négligeable et qu'il est peu probable qu'elle stimule une réaction allergique.
D'après les renseignements fournis, les évaluateurs n'ont pas relevé de problèmes en matière d'innocuité du point de vue toxicologique ou allergénique relativement à l'utilisation de l'ananas de lignée EF2-114 à des fins alimentaires.
Conclusion :
L'examen par Santé Canada des renseignements présentés à l'appui de l'utilisation aux fins alimentaires de la variété d'ananas de lignée EF2-114 ne soulève pas de préoccupations liées à l'innocuité des aliments. Santé Canada est d'avis que les aliments dérivés de cette variété d'ananas sont tout aussi sécuritaires et nutritifs que les aliments issus des variétés d'ananas sur le marché actuellement.
Le présent document d'information sur les aliments nouveaux a été préparé pour résumer l'avis concernant le produit en question fourni par la Direction des aliments, Direction générale des produits de santé et des aliments de Santé Canada. Cet avis est fondé sur l'examen exhaustif des renseignements soumis par le pétitionnaire conformément aux Lignes directrices sur l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux.
(Also available in English)
Pour de plus amples renseignements, veuillez communiquer avec :
Section des aliments nouveaux
Direction des aliments
Direction générale des produits de santé et des aliments
Santé Canada, PL2204A1
251, promenade Frederick Banting
Ottawa (Ontario) K1A 0K9
hc.bmh-bdm.sc@canada.ca
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