Guide technique des mines de métaux : tableau d’évaluation de toxicité sublétale, chapitre 8


Tableau d’évaluation de rapport pour les programmes des Pâtes de Papier et Mines de Métaux: Essai d’inhibition de la croissance d’une algue d’eau douce*

Identification de l’échantillon d’effluent

Nom/Adresse du client:____________

 Nom/Adresse du lab. d’essai: _______________

Instructions pour compléter le tableau

Exigences pour le rapport et l’essai ; exigences des ESEE
Exigences pour le rapport et l’essai ; exigences des ESEE Données consignées? Exigences obligatoires rencontrées?
O N O N NA
Échantillon d’effluent
Type d’effluent (c.-à-d., effluent de procédé, effluent final, etc.)         X
Information sur l’étiquetage/codage de l’échantillon         X
Température de l’échantillon ou d’un sous-échantillon à son arrivée au laboratoire         X
Mesure du pH de l’échantillon avant sa préparation et son utilisation dans l’essai         X
Date du prélèvement et date/heure de réception au laboratoire         X
Date d’utilisation de chaque échantillon dans l’essai (≤ 3 jours après la fin du prélèvement)1          
Organismes soumis à l’essai
Espèce (Pseudokirchneriella subcapitata, anciennement Selenastrumcapricornutum)          
Numéro de souche et origine de la culture         X
Age de la culture servant à fournir l’inoculum algal au début de l’essai entre 3 et 7jours          
Inoculum préparé ≤ 3 heures avant incubation de la microplaque          
Concentration cellulaire initiale de l’inoculum (10 000 ± 1000 cellules/mL)          
Tout aspect ou traitement inhabituel des organismes avant leur utilisation dansl’essai         X
Santé d'organisme
Courbe de croissance des algues, à partir d’un inoculum de la culture mère, déterminée sur une période de 8 à 10 jours en utilisant une fiole Erlenmeyer (2 fois par année pour confirmer la phase de croissance logarithmique). Prenez note : ceci n'est pas une exigence pour le rapport mais c’est une exigence obligatoire.          
Installations et conditions de l’essai
Méthode d’essai (SPE 1/RM/25, deuxième édition, mars 2007)          
Date de la fin de l’essai et énoncé de la durée de l’essai (72 h)          
Personne ayant mené l’essai         X
Température moyenne de l’essai (24 ± 2 °C, mesurée tout au long de l’essai)          
Procédure/taux/durée d’aération de l’échantillon, s’il y a lieu, avant la mise en route de l’essai         X
Procédure, s’il y a lieu, d’ajustement du pH (recommande aucun ajustement si le pHde la solution d’essai est entre 6,5 - 8,5; à l’extérieur de cet intervalle, l’ajustement du pH est une option ou la conduite d’essais parallèles avec et sans ajustement depH)         X
Volume final dans chaque cupule est 220 µL          
pH de l’échantillon avant toute dilution, au début de l’essai         X
pH des deux alvéoles médianes témoins au début et à la fin de l’essai (p. ex. D6 et D7); l’écart de pH entre ces deux lectures ne devrait pas excéder 1,5 unité.         X
Procédure de filtration de l’échantillon (filtré au moyen d’une membrane préconditionnée à pores de 0,45 µm de maille)          
Type(s) et source(s) de l’eau utilisée comme eau témoin /de dilution (même eauutilisée pour la préparation des solutions d’essai et témoin; toute eau témoin/de dilution prélevée sur le terrain doit être passée sur un filtre de 0,45µm avant ajout de nutriments)          
Si l’eau témoin/de dilution n’est pas l’eau réactive, on doit inclure dans l’essai des témoins normalisés additionnels          
Type et quantité de tout produit chimique ajouté à l’eau témoin /de dilution          
# de solutions d’essai (≥ 7 conc. et un témoin, ≥ 10 recommandés). La numérationpeut porter sur moins de 7 concentrations dans les seuls cas suivants : (i) lorsque le dénombrement cellulaire dans les concentrations les plus faibles montre que celles- ci ont eu un effet important (p. ex. >>CI50), il n’est pas nécessaire de dénombrer les cellules dans les concentrations plus élevées; ou (ii) lorsque le dénombrementrévèle l’absence d’effet, on ne dénombrera les cellules que dans 6 concentrations, dont la plus élevée.          
# de répétitions par conc. (≥ 3 répétitions/conc. d’essai et 10 pour le(s)témoin(s));) Dénombrer les cellules dans les 8 alvéoles du témoin normalisé, dans au moins 3 alvéoles contenant chaque concentration d’essai et, le cas échéant, dans chacune des alvéoles du témoin de l’échantillon. Si les résultats obtenus pour les 3 répétitions des concentrations d’essai sont incohérents (c.-à-d., s’ils présentent une variation élevée), on doit dénombrer d’autres répétitions ; 2 des 10 témoins sont utilisés lors des mesures de pH          
Si l’essai porte sur un effluent de mines de métaux, il faut réduire de 25 % le volume final de Na2EDTA · 2H2O afin d’obtenir une concentration finale de 46,9 µg/L dans le milieu d’essai          
Si l’absorbance est utilisée, conc. cellulaire (dénombrement direct) dans les 3 puits contenant une forte/moyenne/faible conc. de la solution d’essai et leurs valeurscorrespondantes estimées par la méthode d’absorbance         X
Toute anomalie dans le déroulement de l’essai, tout problème observé et toute mesure corrective prise          
Résultats
Les concentrations nominales des solutions corrigées en fonction du volume de l’inoculum algal et du milieu d’enrichissement et sont rapportées comme concentrations d’essai (c.-à-d., il n’y a pas une concentration de 100%)          
Conc. cellulaire de chaque répétition (incluant le témoin) après 72 h          
Le rendement cellulaire moyen (± ET)2 à t = 72 h pour chaque traitement (y compris les témoins), avec les coefficients de variation correspondants ; test non valide si le nombre de cellules algales dans les puits témoins ne s’est pas accru de plus de 16 fois en 72 h ou si les estimations du rendement cellulaire dans les puits témoins ne sont pas homogènes (CV > 20%) ou si un gradient inhibiteur est détecté dans les puits témoins          
Correspondance entre les valeurs de concentration cellulaire et l’absorbance ou la fluorescence si ces mesures sont utilisées en remplacement de la concentration cellulaire; mesures d’absorbance ou de fluorescence effectuées seulement après centrifugation des cellules et remise en suspension dans une solution limpide          
CI25 (et limites de confiance à 95%); obtenues au moyen de concentrations dont le volume a été corrigé pour tenir compte de l’ajout de l’inoculum algal et du milieu d’enrichissement; une indication que l’analyse de régression a été utilisée (ICPIN peut être appliqué seulement si l’augmentation du nombre de cellules algales ne peut faire l’objet d’une analyse de régression);  le nom du ou des programmes et des méthodes employés pour calculer les paramètres statistiques, de même que des renvois à ces programmes et méthodes ;  les détails relatifs à toute technique de pondération appliquée aux données          
Les paramètres calculés au moyen d’une analyse de régression doivent être encadrés par les concentrations d’essai; l’extrapolation des paramètres au- delà de la concentration expérimentale maximale ne constitue pas une pratique acceptable          
Les données relatives à une hormèse peuvent être saisies directement puisque tous les points de données peuvent être pris en compte et incorporés dans le modèle de régression; il n’y a aucun équeutage des points de données indiquant une réponse hormétique (c.-à-d., une stimulation ou une réponse « supérieure à celle du témoin » ne se produisant que lors d’une exposition à des concentrations faibles)          
Si les données montrent qu’il y a hormèse et que le programme ICPIN est utilisé, il faut entrer les réponses du témoin en regard des concentrations auxquelles le phénomène se produit          
Les valeurs aberrantes ainsi que la justification de leur suppression         X
Toute stimulation appréciable de la croissance, exprimée en pourcentage de stimulation (nombre de cellules), à quelque concentration que ce soit          
Si la microplaque comprend à la fois un témoin pour l’eau de qualité « réactif» et un témoin pour l’échantillon (lorsque l’eau provenant de l’amont est utilisée en tant qu’eau témoin ou de dilution lors de l’essai), une comparaison statistique pour des différences significatives est effectuée          
Résultats d’essais avec toxiques de référence (à l’intérieur des limites de contrôle (±2 ET) établies lors de l’élaboration de la carte de contrôle du produit)         X
Est-ce que l’essai avec toxique(s) de référence a été effectué dans les 14 jours qui précédaient ou suivaient la date du début de l’essai de toxicité, ou durant celui-ci ?          
Est-ce que l’essai avec toxique de référence a été effectué avec la même culture et les mêmes procédures et conditions d’essai?          
Exigences spécifiques aux programmes des ESEE
Est-ce que des résultats quantitatifs pour l’essai avec  l’échantillon d’eau usée et l’essai avec toxique de référence ont été fournis (pas de résultats < X v/v %) ? - -      
Est-ce que les résultats calculés ont été encadrés par les concentrations d’essai (à l’exception de « >91% ») ? - -      
Pour le programme des ESEE des Pâtes et Papiers : rapport soumis à l’intérieur de 90 j après la fin de l’essai?          

* Comprend les exigences relatives au procès-verbal (rapport) et à la conduite de la méthode indiquées dans l’essai d’inhibition de la croissance d’une algue d’eau douce, modifiée en 2007, ainsi que celles citées dans le Règlement modifiant le Règlement sur les effluents des fabriques de pâtes et papiers et l’annexe 5 du Règlement sur les effluents des mines de métaux (juin 2002).

1 Pour plus d’informations sur la date du début de l’essai, consulter la section 7.4 du Guide pour l’étude du suivi des effets sur l’environnement aquatique par les mines de métaux et la section 6.3 du Guide technique pour l’ESEE par les fabriques de pâtes et papiers.

2 Il y a une petite erreur dans la deuxième édition de SPE 1/RM 25, Méthode d’essai biologique : essai d’inhibition de la croissance de l’algue d’eau douce. À la section 8.1.7. Résultats, au troisième point, le texte indique «le rendement cellulaire moyen (+/-2 ET) ... ». Prendre note qu'il faudrait plutôt lire «le rendement cellulaire moyen (+/-ET)... ».

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