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• Contexte
• Introduction
• Développement du micro-organisme modifié
• Caractérisation du micro-organisme modifié
• Informations sur le produit
• Exposition alimentaire
• Nutrition
• Microbiologie
• Chimie
• Toxicologie
• Allergénicité
• Conclusion

Contexte

Santé Canada a informé Chr. Hansen A/S ( filiale du groupe Novonesis) qu'il n'émet aucune objection à l'utilisation de leur mélange d'oligosaccharides composé de 2′-fucosyllactose (2′-FL), 3-fucosyllactose (3-FL), 6′-sialyllactose (6′-SL), lacto-N-tétraose (LNT), sel de sodium de 3′-sialyllactose (3′-SL) et de sel de sodium de 6′-sialyllactose (6′-SL) produits par des souches génétiquement modifiées d'Escherichia coli BL21(DE3) comme un ingrédient dans les préparations pour nourrissons et enfants en bas âge. Les préparations pour nourrissons et les fortifiants du lait humain contenant cet aliment nouveau doivent en outre faire l'objet d'un examen préalable à la mise sur le marché en vertu du titre 25. Le ministère a mené son évaluation conformément à ses Lignes directrices sur l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux. Ces lignes directrices sont basées sur des principes internationalement acceptés pour établir l'innocuité des aliments à caractères nouveaux.

On trouvera ci-après un résumé de l'avis de Chr. Hansen A/S et de l'évaluation effectuée par Santé Canada. Ce document ne contient aucune information commerciale confidentielle.

Introduction

Les composés 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL ont été produits individuellement par des souches E. coli BL21(DE3) génétiquement modifiées Après purification, les oligosaccharides sont combinés pour obtenir le mélange commercial.

Chr. Hansen A/S a développé les souches de E. coli BL21(DE3) génétiquement modifiées à l'aide de techniques de biologie moléculaire standards. Des modifications génétiques ont été apportées à quatre souches d' E. coli BL21(DE3) dans le but d'insérer les gènes impliqués dans la voie de biosynthèse des oligosaccharides pour chaque oligosaccharide d'intérêt. Le 3-FL a été produit par la souche JBT-3FL, le LNT a été produit par la souche JBT-LNT, le 3′-SL a été produit par la souche JBT-3SL et le 6′-SL a été produit par la souche JBT-6SL. En outre, deux souches optionnelles de "dégradation" ont été évaluées, JBT-LN(n)T-DS et JBT-SL-DS, qui ont été génétiquement modifiées pour absorber et métaboliser/dégrader des sous-produits et métabolites spécifiques du sucre résiduel dans le milieu de fermentation avant la purification de l'oligosaccharide cible. Lors de la production de LNT à l'aide de la souche JBT-LNT, la souche de dégradation facultative JBT-LN(n)T-DS peut être ajoutée à la fin de la fermentation pour dégrader les sous-produits glucidiques résiduels. De même, lors de la production de 3′-SL et de 6′-SL à l'aide des souches JBT-3SL et JBT-6SL, respectivement, la souche de dégradation facultative JBT-SL-DS peut être ajoutée à la fin de la fermentation pour dégrader les sous-produits glucidiques résiduels.

Chr. Hansen A/S a noté que le composant 2′-FL du mélange est produit par la souche E. coli BL21(DE3) JBT-2FLΔlacZ, qui a été évaluée précédemment et dont l'utilisation a été autorisée à un taux d'inclusion de 1,2 g/L pour les préparations pour nourrissons et de 2,4 g/L pour les préparations pour enfants en bas âge,. Par conséquent, il n'a pas été nécessaire de réévaluer l'innocuité du composant 2′-FL.

Les doses d'emploi prévues pour chaque oligosaccharide tel qu'il est consommé sont les suivantes : 2′-FL (3,0 g/L), 3-FL (0,75 g/L), LNT (1,5 g/L), 3′-SL (0,23 g/L) et 6′-SL (0,28 g/L). Le niveau d'utilisation prévu de 2′-FL est plus élevé que le taux d'inclusion précédemment autorisé. Le Bureau de la sécurité chimique (BCS) et le Bureau des sciences de la nutrition (BNS) ont évalué les implications de l'ajout d'un volume plus élevé du produit 2′-FL final dans les préparations pour nourrissons et enfants en bas âge. Diverses limites maximales d'utilisation sont également proposées dans les préparations pour nourrissons et enfants en bas âge.

Cette évaluation porte sur l'innocuité du produit final composite et ne s'étend pas à la vente des oligosaccharides pris individuellement. La seule exception est l'ingrédient 2′-FL précédemment évalué qui continuera d'être autorisé à être vendu en tant que produit distinct.

Il a été confirmé que les oligosaccharides de lait synthétisés par voie bactérienne contenus dans le mélange de Chr. Hansen A/S sont chimiquement équivalents aux oligosaccharides isolés dans le lait humain. Les oligosaccharides présents dans le lait humain peuvent contribuer à la santé des nourrissons et des jeunes enfants en tant que substrat prébiotique pour les bactéries commensales et en tant que modulateur du système immunitaire. Cette évaluation n'a pas porté sur les allégations potentielles concernant les oligosaccharides présents dans le lait maternel.

L'évaluation de réalisée par les évaluateurs scientifiques de la Direction des aliments et de la nutrition a été effectuée conformément aux Lignes directrices sur l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux de Santé Canada. Ces lignes directrices sont fondées sur des efforts d'harmonisation avec d'autres autorités réglementaires et reflètent l'approche internationale dans ce domaine (p. ex. Codex Alimentarius). L'évaluation de l'innocuité a pris en compte : la manière dont le mélange d'oligosaccharides a été développé; la comparaison de la composition et de la qualité nutritionnelle des oligosaccharides de lait synthétisés par voie bactérienne avec les oligosaccharides de lait humain et le risque que le mélange d'oligosaccharides soit toxique ou provoque des réactions allergiques. Chr. Hansen A/S a fourni des données qui démontrent que les oligosaccharides 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL peuvent être utilisés en toute sécurité dans les préparations pour nourrissons et enfants en bas âge.

La Direction des aliments et de la nutrition est légalement responsable de l'évaluation préalable à la mise en marché des aliments nouveaux et des ingrédients alimentaires nouveaux, conformément au titre 28 de la partie B du Règlement sur les aliments et drogues (aliments nouveaux). Comme les oligosaccharides 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL sont produits par des bactéries génétiquement modifiées, le mélange est considéré comme un aliment nouveau en vertu de la partie suivante de la définition des aliments nouveaux : "c) une denrée alimentaire dérivée d'un végétal, d'un animal ou d'un micro-organisme qui a été génétiquement modifié de telle sorte que

iii. Un ou plusieurs caractères de la plante, de l'animal ou du micro-organisme ne se situent plus dans la fourchette prévue pour cette plante, cet animal ou ce micro-organisme.

Développement des micro-organismes modifiés

Les souches de production E. coli BL21(DE3) JBT-3FL, JBT-LNT, JBT-3SL et JBT-6SL, ainsi que les souches de dégradation facultatives E. coli BL21(DE3) JBT-LN(n)T-DS et JBT-SL-DS, dérivent de la souche parentale E. coli BL21(DE3) non pathogène bien caractérisée. La souche parentale a été génétiquement modifiée par l'insertion de voies de biosynthèse, ce qui a permis d'obtenir des souches présentant les caractéristiques phénotypiques suivantes :

1. JBT-3FL : utilise le lactose pour produire du 3-FL en important efficacement le lactose dans la cellule, fermente des sources de carbone simples comme le glycérol, exprime une α-1,3-fucosyltransférase hétérologue qui catalyse la synthèse du 3-FL à partir du lactose et du GDP-fucose, surexprime les gènes impliqués dans la synthèse du GDP-fucose et sécrète du 3-FL dans le milieu de culture;
2. JBT-LNT : utilise le lactose pour produire de la LNT en important efficacement le lactose dans la cellule, fermente des sources de carbone simples comme le glycérol, exprime une β-1,3-N-acétylglucosaminyltransférase hétérologue qui catalyse la LNT II à partir du lactose, exprime une β-1,3-galactosyltransférase hétérologue qui catalyse la synthèse de la LNT à partir de la LNT II, surexprime les gènes impliqués dans la synthèse de l'UDP-galactose et de l'UDP-N-acétylglucosamine, et sécrète la LNT dans le milieu de culture;
3. JBT-3SL : utilise le lactose pour produire du 3′-SL en important efficacement le lactose dans la cellule, fermente des sources de carbone simples comme le glycérol, exprime une α-2,3-sialyltransférase hétérologue qui catalyse la synthèse du 3′-SL à partir du lactose et de l'acide CMP-sialique, surexprime les gènes impliqués dans la synthèse de l'acide CMP-sialique et sécrète du 3′-SL dans le milieu de culture;
4. JBT-6SL : présente les mêmes caractéristiques métaboliques que JBT-3SL, sauf qu'elle exprime une α-2,6-sialyltransférase hétérologue (au lieu de l'α-2,3-sialyltransférase) qui catalyse la synthèse de 6′-SL à partir du lactose et de l'acide CMP-sialique;
5. JBT-LN(n)T-DS (souche de dégradation optionnelle) : dégrade les sous-produits glucidiques dans le milieu de culture à la fin de la fermentation avec JBT-LNT en surexprimant les gènes impliqués dans l'absorption et le métabolisme des glucides; et, enfin, JBT-SL-DS (souche de dégradation optionnelle) : dégrade les sous-produits glucidiques dans le milieu de culture à la fin de la fermentation avec JBT-LNT,
6. JBT-SL-DS (souche de dégradation optionnelle) : dégrade les sous-produits glucidiques dans le milieu de culture en fin de fermentation avec JBT-3SL et JBT-6SL en surexprimant les gènes impliqués dans l'absorption et le métabolisme des glucides.

Caractérisation des micro-organismes modifiés

Le séquençage du génome entier des souches de production et des souches de dégradation a été réalisé pour caractériser les modifications génétiques introduites dans leurs génomes respectifs. Aucun vecteur plasmidique n'a été détecté dans les six souches. Aucun réarrangement génétique n'a été détecté et toutes les insertions et délétions étaient bien caractérisées. La stabilité génétique des modifications génétiques a été démontrée pour toutes les souches de production et de dégradation.

Des rapports d'analyse des cadres de lecture ouverts (ORF) et des polymorphismes de nucléotides simples (SNP) ont été fournis pour tous les loci génétiquement modifiés dans les six souches. Une justification a été fournie pour expliquer pourquoi les quelques ORF et SNP non intentionnels détectés ne posent pas de risque pour la sécurité. Aucune protéine de fusion putative ou mutation par déplacement de cadre n'a été identifiée. En outre, l'expression putative de protéines non intentionnelles ne pose aucun problème d'innocuité puisque des étapes de purification approfondies sont appliquées au cours du processus de fabrication afin d'éliminer les protéines résiduelles et l'ADN recombinant.

Les séquences d'ADN donneur des constructions génétiques insérées dans le chromosome des quatre souches de production et des deux souches de dégradation proviennent de la souche parentale E. coli BL21(DE3) (amplifiée à partir de l'ADN génomique), de la souche étroitement apparentée non pathogène et bien caractérisée E. coli K-12 (amplifiée à partir de l'ADN génomique ou synthétique), et de sources hétérologues bien caractérisées (toutes produites synthétiquement). Il n'y a pas de problème d'innocuité concernant le transfert potentiel d'ADN non ciblé provenant de sources hétérologues puisque les gènes d'intérêt ont été produits synthétiquement. Les éléments régulateurs ont également été produits synthétiquement à partir d'organismes donneurs bien caractérisés. Sur la base des informations fournies, il n'y a pas de problème de d'innocuité concernant les organismes donneurs utilisés lors du développement des souches de production et des souches de dégradation.

Sur la base des informations fournies concernant la caractérisation moléculaire des six souches, il n'y a pas de problème d'innocuité, du point de vue de la biologie moléculaire, concernant les 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6'-SL produits par des souches de production E. coli BL21(DE3) génétiquement modifiées, ni l'utilisation des deux souches de dégradation facultatives pour améliorer la pureté du produit final.

Informations sur le produit

Le mélange 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen est fabriqué par la fermentation de souches de production dans des conditions stériles dans une installation conforme aux BPF et fonctionnant selon les principes de l'analyse des risques et de la maîtrise des points critiques (HACCP). Chacun des cinq oligosaccharides (2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL) est d'abord produit individuellement par fermentation microbienne séparée, puis hautement purifié et enfin mélangé pour produire le mélange commercial. Les étapes de traitement et les conditions de fermentation sont optimisées pour chaque oligosaccharide. En bref, les étapes sont les suivantes :

1. La fermentation est réalisée conformément à une procédure standard, en utilisant des milieux définis ne contenant pas d'antimicrobiens ou d'inhibiteurs. Pendant la fermentation, chaque oligosaccharide est efficacement sécrété dans le milieu;
2. Lors de la production de LNT, la souche de dégradation facultative coli BL21(DE3) JBT-LN(n)T-DS peut être ajoutée à la fin de la fermentation pour dégrader les sous-produits glucidiques résiduels;
3. Lors de la production de 3′-SL et de 6′-SL, la souche de dégradation facultative coli BL21(DE3) JBT-SL-DS peut être ajoutée à la fin de la fermentation pour dégrader les sous-produits glucidiques résiduels;
4. Des étapes de purification permettent d'éliminer et d'inactiver la biomasse microbienne du filtrat contenant l'oligosaccharide. Les étapes de purification en aval éliminent les impuretés telles que les protéines, l'ADN, les acides organiques et les sels inorganiques,
5. Les dernières étapes de filtration assurent l'élimination des endotoxines et des micro-impuretés résiduelles. Le produit purifié est ensuite séché pour obtenir une poudre prête à l'emploi.

Exposition alimentaire

Les nourrissons alimentés avec des préparations à base de lait animal sans ajout de sources d'oligosaccharides de lait humain (HMO) sont exposés à moins d'oligosaccharides que les nourrissons nourris au lait maternel. Les concentrations moyennes en HMO vont de 20 g/l dans le colostrum à 12 g/l dans le lait maternel mature^{Note de bas de page 1Note de bas de page 2}, contre 1 g/l dans le colostrum et environ 20 fois moins dans le lait bovin mature.^{Note de bas de page 3}

Le mélange produit par Chr. Hansen A/S est composé de 5 oligosaccharides individuels. Les niveaux des oligosaccharides individuels se situent tous dans les fourchettes rapportées dans le lait maternel au niveau d'utilisation maximal proposé pour le mélange (6,96 g/L). En utilisant le niveau d'utilisation maximal proposé (y compris le dépassement), avec le niveau de consommation prudent de 260 ml/kg pour les préparations pour nourrissons^{Note de bas de page 4}, l'apport quotidien des cinq oligosaccharides pour les nourrissons (p95) et les tout-petits (p90) sur la base du poids corporel est estimé à 1,81 g/kg pc par jour et 0,468 g/kg pc par jour, respectivement.

Nutrition

Les HMO sont des glucides complexes non digestibles et structurellement diversifiés qui représentent le troisième composant solide le plus abondant du lait maternel. Plus de 200 structures différentes d'HMO ont été identifiées. La concentration et la composition des HMO dans le lait maternel varient en fonction de facteurs tels que le bagage génétique de la mère (sécrétrice ou non-sécrétrice d'HMO), les facteurs environnementaux, la situation géographique, le stade de lactation, l'âge gestationnel et la santé de la mère.^{Note de bas de page 5}

Les HMO ne constituent pas une source d'énergie directe pour le nourrisson. La plupart des HMO atteignent le côlon où ils sont utilisés par des bactéries intestinales spécifiques et seulement 1 % sont absorbés. Rien n'indique que l'absorption des 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL fabriqués par Chr. Hansen A/S diffère de celle de composants similaires présents dans le lait maternel. D'après les informations fournies, le mélange d'oligosaccharides ne devrait pas avoir d'effet négatif sur l'absorption des nutriments.

Une étude clinique multicentrique randomisée et contrôlée sur la croissance et la tolérance du mélange 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL a été soumise et examinée^{Note de bas de page 6}. Les nourrissons ont reçu une formule expérimentale à base de lait contenant ces oligosaccharides ou une formule similaire sans ces ingrédients, qui a servi de contrôle. Un groupe nourri au lait maternel a également été inclus comme groupe de référence. Cette étude ayant été menée pendant la pandémie de COVID-19, une modélisation statistique supplémentaire a été réalisée pour tenir compte des écarts par rapport au protocole. Les aspects statistiques de l'étude ont été examinés par le Bureau de l'intégration des données, des sciences et des connaissances (BDSKI). Dans l'ensemble, l'étude fournit des preuves de la sécurité et de la tolérance des mélanges 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL dans les préparations pour nourrissons, qui ont été extrapolées aux préparations pour enfants en bas âge.

D'après les informations fournies, l'utilisation alimentaire proposée des mélanges 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen à une concentration maximale de 6,96 g par litre dans les préparations pour nourrissons ou enfants en bas âge telles qu'elles sont données (y compris les excédents) ne soulève aucune préoccupation d'ordre nutritionnel.

Microbiologie

La souche hôte, E. coli BL21(DE3), est une souche non pathogène bien caractérisée qui a été largement utilisée comme hôte pour l'expression de protéines recombinantes. Elle est dépourvue du plasmide de fertilité et est donc incapable de transférer son ADN à d'autres organismes. Cette souche est incapable de coloniser le tractus gastro-intestinal humain, ne produit pas d'antibiotiques et ne possède pas de gènes de résistance aux antimicrobiens.

Les spécifications microbiologiques et les certificats d'analyse (CoA) de cinq lots non consécutifs des mélanges 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen ont été fournis. Les spécifications, les méthodes et les résultats des tests ont tous été jugés acceptables. Cet aliment nouveau a été testé pour détecter la présence de pathogènes à haut risque pour ce type d'aliment (tels que Cronobacter spp., Salmonella spp. et Enterobacteriaceae) et les cinq lots ont respecté les seuils spécifiés. Les résultats des tests ont démontré avec succès l'absence des souches de production et des souches de dégradation. Les spécifications microbiologiques ne posent pas de problème si elles sont respectées par le fabricant.

La souche mère E. coli BL21(DE3) ne produit pas de lipopolysaccharides à longue chaîne (LPS) et les endotoxines qu'elle produit sont considérées comme non toxiques. Néanmoins, une étape de filtration est utilisée à la fin du processus de fabrication pour éliminer les endotoxines résiduelles. Les spécifications incluent une limite pour les endotoxines et le CoA de 5 lots confirme que les résultats des tests d'endotoxines se situent bien en dessous de la limite spécifiée.

Certaines des souches de production ou de dégradation possèdent des gènes de résistance antimicrobienne intégrés dans leur génome à la suite du processus de développement des souches. Toutefois, ces gènes de résistance antimicrobienne ne posent pas de problème de d'innocuité puisque le mélange d'oligosaccharides est dépourvu d'ADN transgénique, comme l'a démontré l'analyse par qPCR en temps réel de cinq lots non consécutifs. En outre, les produits d'expression des gènes de résistance aux antimicrobiens ne posent pas de problème puisque la fermentation a lieu sans utilisation d'antimicrobiens et que le mélange d'oligosaccharides est dépourvu de protéines, comme l'a démontré l'analyse de cinq lots.

Sur la base des informations fournies, le mélange de Chr. Hansen contenant 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL ne pose aucun problème d'innocuité d'un point de vue microbiologique.

Chimie

Les spécifications relatives aux oligo-éléments (arsenic, cadmium, plomb et mercure) et à la mycotoxine aflatoxine M1 établies par le pétitionnaire peuvent être systématiquement respectées sur la base des résultats d'analyse fournis par le pétitionnaire. Les concentrations estimées de ces contaminants dans les préparations pour nourrissons et les préparations pour jeunes enfants proposées seraient bien inférieures aux niveaux de fond généralement observés dans des aliments similaires sur le marché canadien. En outre, il a été déterminé que l'exposition potentielle à ces oligo-éléments résultant de la consommation de préparations contenant le mélange d'oligosaccharides à la dose maximale demandée contribuait à des quantités négligeables de l'exposition alimentaire à l'arsenic et au plomb, et qu'elle était inférieure de plusieurs ordres de grandeur à leurs valeurs toxicologiques de référence respectives dans le cas du cadmium et du mercure. Dans l'ensemble, l'exposition potentielle à l'arsenic, au cadmium, au plomb et au mercure résultant des utilisations proposées des mélanges 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen ne devrait pas poser de problème de sécurité chimique.

La Section des contaminants alimentaires (SCA) note que les résultats d'analyse pour l'arsenic, le cadmium et le mercure sont systématiquement non détectés à des niveaux 2 à 20 fois inférieurs aux spécifications fournies. Conformément au principe ALARA (niveau le plus bas qu'il soit raisonnablement possible d'atteindre), la SFC encourage le pétitionnaire à abaisser les spécifications afin de refléter plus précisément les concentrations d'arsenic, de cadmium et de mercure trouvées dans le mélange d'oligosaccharides.

Une liste des substances utilisées lors de la fabrication de chacun des composants 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL produits par fermentation de souches E. coli BL21(DE3) a été incluse dans la soumission. Les ingrédients utilisés dans les milieux de fermentation pour les cultures telles que les souches de production d'E. coli BL21(DE3) ne sont généralement pas réglementés en tant qu'additifs alimentaires et il n'y a généralement pas d'exigence en vertu du RAD pour leur examen préalable à la mise sur le marché. Cependant, le pétitionnaire est tenu de s'assurer que l'utilisation de toute substance dans la fabrication n'entraîne pas une violation de l'article 4 de la loi sur les aliments et les médicaments (Food and Drugs Act). Le pétitionnaire a indiqué que toutes les matières utilisées dans le processus de fabrication sont de qualité alimentaire et répondent aux spécifications énoncées dans le Codex des produits chimiques alimentaires (FCC) et/ou dans le Compendium combiné des spécifications des additifs alimentaires préparé par le Comité mixte FAO/OMS d'experts sur les additifs alimentaires (JECFA), lorsqu'elles sont disponibles.

Le pétitionnaire a fourni des données démontrant à suffisance que les composants 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL produits par des souches génétiquement modifiées d'E. coli BL21(DE3), au niveau de la structure moléculaire, sont équivalents à leurs homologues trouvés dans le lait humain. Ces oligosaccharides contiennent également de petites quantités résiduelles de glucides structurellement apparentés en tant qu'impuretés, qui sont tous naturellement présents dans le lait maternel.

Sur la base des informations fournies, les utilisations proposées des mélanges 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen, produits par fermentation de souches génétiquement modifiées dérivées d'E. coli BL21(DE3), ne posent aucun problème de sécurité chimique.

Toxicologie

Le pétitionnaire a fourni des études toxicologiques utilisant le mélange d'oligosaccharides de Chr. Hansen contenant du 2′-FL (47,1 %), du 3-FL (16,0 %), du LNT (23,7 %), du sel de sodium de 3′-SL (4,1 %) et du sel de sodium de 6′-SL (4,0 %). Les études ont été menées conformément aux lignes directrices de l'Organisation de coopération et de développement économiques (OCDE) et aux principes de bonnes pratiques de laboratoire.

Aucune preuve de mutagénicité/génotoxicité (test de mutation inverse bactérienne, test du micro noyau in vitro) n'a été observée dans les études fournies, ce qui suggère qu'il est peu probable que les 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen soient génotoxiques. La dose sans effet nocif observé (NOAEL) pour le mélange 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen dans une étude de toxicité alimentaire de 90 jours chez le rat a été conclue à 10 % dans l'alimentation (c'est-à-dire correspondant à des apports moyens de 5,67 g/kg pc/jour pour les mâles et de 6,97 g/kg pc/jour pour les femelles), soit la plus forte dose testée.

Dans une étude de 21 jours sur des porcelets nouveau-nés, le lait de remplacement contenant le mélange 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen à une dose maximale de 8,0 g/L (correspondant à ~3,6 g/kg pc/jour) a été bien toléré. Cette dose sur le site est ~2 fois plus élevée que la dose maximale d'utilisation demandée la plus élevée chez les nourrissons sur la base du poids corporel (c'est-à-dire 1,81 mg/kg pc par jour). Aucun problème de sécurité n'a été signalé lors d'un essai clinique contrôlé, randomisé et en double aveugle portant sur la consommation de préparations pour nourrissons contenant 3 g/L de 2′-FL, 0,8 g/L de 3-FL, 1,5 g/L de LNT, 0,2 g/L de 3′-SL et 0,3 g/L de 6′-SL pendant 16 semaines, fourni par le pétitionnaire.

Lorsque l'on compare le NOAEL de l'étude de toxicité sur 90 jours avec l'exposition estimée la plus élevée par catégorie de population (P95 nourrissons, P90 enfants en bas âge), les marges d'exposition (MOE) sont faibles, avec une fourchette allant d'environ 3 à 15. Toutefois, compte tenu de l'absence d'effets toxicologiquement pertinents aux doses les plus élevées testées chez les rats et les porcelets, de l'absence de problèmes de sécurité dans les essais cliniques chez l'homme, ainsi que des conservatismes dans l'estimation de l'exposition, les ME sont considérées comme suffisantes du point de vue de la sécurité.

Sur la base des informations fournies, l'utilisation des mélanges 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen dans les préparations pour nourrissons et enfants en bas âge, aux doses d'emploi proposées, ne soulève aucun problème d'ordre toxicologique.

Allergénicité

Les HMO ne sont pas protéiniques et ne devraient pas provoquer de réaction allergique médiée par les immunoglobulines E (IgE) chez les consommateurs. En outre, les HMO ont un historique d'utilisation sûre dans les aliments pour nourrissons du fait de leur présence dans le lait maternel.

Comme déterminé par une version modifiée de l'essai Bradford (Nanoquant), la teneur globale en protéines du mélange 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen est faible (spécifications ≤ 100 µg de protéines/g de préparation). Les données issues de cinq lots du mélange d'oligosaccharides ont démontré qu'il est essentiellement dépourvu de protéines et qu'il ne devrait donc pas poser de problème allergique pour les consommateurs.

Sur la base des informations fournies, l'utilisation proposée des mélanges 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen dans les préparations pour nourrissons et enfants en bas âge ne pose aucun problème d'allergénicité.

Conclusion

Après avoir examiné les renseignements présentés à l'appui de l'utilisation du mélange 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen dérivé de souches génétiquement modifiées d'E. coli BL21(DE3) dans les préparations pour nourrissons et tout-petits, Santé Canada ne soulève aucune préoccupation liée à l'innocuité des aliments.

L'avis de Santé Canada ne porte que sur l'utilisation du mélange 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL de Chr. Hansen comme ingrédient dans les préparations pour nourrissons et tout-petits. Les préparations pour nourrissons et les fortifiants pour le lait humain contenant les mélanges 2′-FL, 3-FL, LNT, 3′-SL et 6′-SL dérivés de souches génétiquement modifiées d'E. coli BL21(DE3) doivent en outre faire l'objet d'un examen préalable à la mise en marché en vertu du titre 25.

Ce document d'information sur les aliments nouveaux a été préparé pour résumer l'avis concernant le produit en question fourni par la Direction des aliments et de la nutrition, Direction générale des produits de santé et des aliments, Santé Canada. Cet avis est fondé sur l'examen exhaustif des renseignements soumis par le demandeur conformément aux Lignes directrices sur l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux.

Pour de plus amples informations, veuillez contacter

Section des aliments nouveaux
Direction des aliments et de la nutrition
Direction générale des produits de santé et des aliments
Santé Canada, PL2204A1
251, promenade Frederick Banting
Ottawa, Ontario K1A 0K9
bmh-bdm@hc-sc.gc.ca