Information sur les aliments nouveaux : Variété de maïs MON 95275 résistant aux insectes

Sur cette page

• Contexte
• Introduction
• Mise au point de la plante modifiée
• Caractérisation de la plante modifiée
• Information sur le produit
• Exposition alimentaire
• Nutrition
• Données chimiques
• Toxicologie
• Allergénicité
• Conclusion

Contexte

Santé Canada a notifié Bayer CropScience Inc. qu'il ne s'oppose pas à l'utilisation alimentaire d'une variété de maïs MON 95275 résistante aux insectes (ci-après dénommée MON 95275). La compagnie a indiqué que la variété MON 95275 ne sera pas proposée pour une utilisation commerciale en tant que produit autonome, mais qu'elle sera probablement combinée avec d'autres variétés approuvées par sélection conventionnelle pour fournir une protection contre les ravageurs du maïs en surface et en sous-sol, ainsi qu'une tolérance aux herbicides pour un contrôle efficace des mauvaises herbes.

Le ministère a procédé à une évaluation complète de l'innocuité de cette variété de maïs conformément à ses Lignes directrices sur l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux. Ces lignes directrices reposent sur des principes internationalement reconnus pour établir l'innocuité des aliments à caractères nouveaux. On trouvera ci-après un résumé de l'avis de Bayer CropScience Inc. et de l'évaluation effectuée par Santé Canada. Ce document ne contient aucun renseignement commercial confidentiel.

Introduction

Bayer CropScience Inc. a mis au point une variété de maïs génétiquement modifié (Zea mays L.), MON 95275, qui présente une résistance à divers ravageurs des racines du maïs (Diabrotica ssp., Coleoptera; Chrysomelidae). Le caractère de résistance aux insectes a été obtenu par l'expression des nouvelles protéines insecticides Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 ainsi que de l'ARN double brin DvSnf7.1 (ARNdb).

L'ARNds DvSnf7.1 permet un mécanisme de suppression génique médié par l'ARNi à l'égard de la séquence du gène snf7 de la chrysomèle des racines du maïs. Cet ARNdb est consommé par Diabrotica virgifera virgifera et est reconnu par la machinerie naturelle d'interférence ARN (ARNi) de la chrysomèle des racines du maïs, ce qui entraîne une régulation à la baisse du gène snf7 chez les Diabrotica ciblés, conduisant à une mortalité.

Récemment, une révision du système de nomenclature pour les protéines pesticides d'origine bactérienne a été instaurée, qui a reclassé les protéines Cry75Aa1.1 et Vip4Da2 précédemment connues en tant que Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2, respectivement. Malgré ces révisions de la nomenclature, les protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 suivent le même mode d'action général que les autres protéines insecticides de Bacillus thuringiensis actuellement utilisées commercialement pour la protection des cultures contre les insectes.

L'évaluation de l'innocuité réalisée par les évaluateurs de la Direction des aliments et de la nutrition a été effectuée conformément aux Lignes directrices sur l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux de Santé Canada. Ces lignes directrices reposent sur des efforts d'harmonisation avec d'autres autorités réglementaires et reflètent les documents d'orientation internationaux dans ce domaine (par exemple, le Codex Alimentarius). L'évaluation a porté sur les points suivants : comment le maïs MON 95275 résistant aux insectes a été développé, comment la composition et l'innocuité nutritionnelles de cette variété ont été comparées à celles de son comparateur non modifié, et quel est le potentiel de cette variété à présenter un enjeu de toxicité ou d'allergie. Bayer CropScience Inc. a fourni des données prouvant que cette variété peut être utilisée sans danger comme aliment au Canada.

La Direction des aliments et de la nutrition est légalement responsable de l'évaluation préalable à la mise en marché des aliments nouveaux et des nouveaux ingrédients alimentaires, comme le précise le titre 28 de la partie B des Règlements sur les aliments et les drogues (aliments nouveaux). Le maïs MON 95275 résistant aux insectes est considéré comme un aliment nouveau selon la partie suivante de la définition des aliments nouveaux : « c) aliment dérivé d'un végétal, d'un animal ou d'un micro-organisme qui, ayant été modifié génétiquement, selon le cas :

1. présente des caractères qui n'avaient pas été observés auparavant ».

Mise au point de la plante modifiée

La variété MON 95275 a été développée par transformation d'embryons de maïs immatures de la variété LH244 par Agrobacterium en utilisant le vecteur de transformation PV-ZMIR525664, qui contient un ADN-T unique englobant quatre cassettes d'expression. Une cassette a permis l'expression de l'ARNdb DvSnf7.1 (deux séquences complémentaires inversées dvSnf7.1) conférant une résistance à la chrysomèle des racines du maïs (Diabrotica virgifera virgifera). Deux cassettes d'expression génique ont été introduites, entraînant l'expression des protéines insecticides Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2, respectivement. L'expression des protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 confère une résistance insecticide aux Diabrotica ssp., Coleoptera, et Chrysomelidae ravageurs du maïs. Enfin, la quatrième cassette d'expression entraîne l'expression de la protéine CP4 EPSPS, qui a été utilisée comme marqueur de sélection lors du processus de développement, mais qui a été excisée de la variété MON 95275 finale.

Après une transformation réussie, les plantes R0 ont été autopollinisées pour générer des graines R1, qui ont été soumises à un test PCR pour détecter la présence d'ADN-T et l'absence de séquences appartenant au squelette du vecteur. Les plantes R1 ont été autofécondées pour générer des plantes R2 homozygotes positives, qui ont été croisées avec une variété exprimant la recombinase Cre (variété LH244 Cre) pour exciser le marqueur de sélection cp4 epsps du site d'intégration, ce qui a permis d'obtenir des plantes F1. Le développement de la variété Cre a impliqué une étape de transformation avec le vecteur PV-ZMOO513642, qui contient son propre marqueur de sélection (c.-à-d. le gène nptII).

Le vecteur PV-ZMOO513642 a ensuite été retiré des descendances par sélection conventionnelle donnant des plantes F2, F3, F4, F5 et F6, qui étaient exemptes d'epsps cp4, de gènes cre et de séquences appartenant au squelette plasmidique. Le génotype a été confirmé dans les plantes F4 par séquençage de nouvelle génération (SNG) et essais PCR. Les plantes F4 ont ensuite été croisées par des techniques de sélection conventionnelles avec un parent autofécondé élite appartenant à Bayer (HCL617) pour produire des graines F4F1 hémizygotes. Enfin, une série d'autofécondations a été réalisée pour produire les plantes des générations F4F2, F4F3, F4F4, F5, F5F1 et F6. Les plantes F4, F4F1, F5, F5F1 et F6 ont été utilisées pour la caractérisation moléculaire de MON 95275, l'analyse de ségrégation a été effectuée sur les plantes des générations F4F2, F4F3 et F4F4, et la génération F6 sera utilisée pour le développement commercial.

Les séquences codantes de la protéine Vpb4Da2 ont été synthétisées synthétiquement et représentent une version optimisée par codon de la séquence de type sauvage trouvée chez Bacillus thuringiensis. La séquence codante de la protéine Mpp75Aa1.1 a été synthétisée et représente une version optimisée par codon de la forme précurseur complète de la protéine insecticide Mpp75Aa1 de Brevibacillus laterosporus (anciennement identifiée comme Bacillus laterosporus), dans laquelle le peptide signal natif transitant par la membrane a été supprimé. Comme de l'ADN synthétique a été utilisé pour ces séquences codantes, il n'est pas prévu que d'autres gènes de B. laterosporus ou de B. thuringensis soient transférés dans le génome de la variété MON 95275.

Les protéines insecticides Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 n'ont pas encore été évaluées par Santé Canada.

L'ARNdb DvSnf7.1 a été conçu pour être partiellement complémentaire au gène snf de la chrysomèle des racines du maïs, codant une partie spécifique de la protéine de la sous-unité Snf7 de ce ravageur. Les séquences à double répétition inversée qui forment la partie active de l'ARNdb DvSnf7.1 sont identiques à celles de la cassette de suppression dvSnf7 introduite dans la variété MON 87411, qui est une variété de maïs évaluée et approuvée par Santé Canada. Les cassettes de suppression dvSnf7.1 et dvSnf7 partagent les mêmes séquences fonctionnelles, mais dvSnf7.1 a une séquence leader différente afin d'augmenter l'efficacité de l'expression. L'innocuité de la séquence leader dvSnf7.1 a été évaluée par une analyse bioinformatique, qui sera discutée plus loin.

Le requérant a fourni des informations à l'appui de l'innocuité et de l'antécédent d'utilisation de chaque organisme donneur et de l'organisme receveur (c'est-à-dire la variété publique de maïs élite LH244 transformable et autofécondé). Aucun de ces organismes ne pose un enjeu de santé ou d'innocuité.

Caractérisation de la plante modifiée

Le séquençage de nouvelle génération (SNG) a été utilisé pour évaluer le nombre de copies de l'ADN-T inséré et pour caractériser les séquences de jonction dans cinq générations (F4, F4F1, F5, F5F1 et F6) de la variété MON 95275. En outre, le séquençage des amplicons PCR spécifiques à l'ADN inséré a été utilisé pour déterminer l'intégrité de l'ADN-T ainsi que le site d'intégration et les séquences génomiques flanquantes.

En ce qui concerne les paramètres de qualité du SNG, la compagnie a déclaré une profondeur de couverture minimale de 75 X pour chaque plante séquencée, ce qui a été reporté comme étant adéquat pour fournir une couverture complète et la détection de tout ADN inséré ainsi que des fragments potentiellement insérés de manière non intentionnelle. Le requérant a utilisé le gène natif pdc3^{Note de bas de page 1}, qui est présent en un seul exemplaire dans le génome du maïs, pour estimer la profondeur de la couverture à la fois dans le contrôle conventionnel (LH244) et dans la variété MON 95275. La compagnie a également fait état d'une couverture complète du génome. L'étendue de la couverture a été déterminée en identifiant tous les gènes natifs à copie unique dans l'ensemble du génome de référence du maïs (se comptant en centaines) avant d'en sélectionner deux au hasard par chromosome. Ensuite, la compagnie a entièrement cartographié ces deux gènes de maïs aléatoires à copie unique provenant de chaque chromosome à la fois dans le contrôle conventionnel et dans la variété MON 95275 (génération F4), ce qui donne une bonne indication de l'étendue de la couverture.

La caractérisation moléculaire a mis en évidence une insertion unique d'ADN-T au niveau du chromosome 3 de la variété MON 95275. Il a été démontré que les séquences de jonction étaient liées par des séquences d'ADN contiguës, connues et attendues, ce qui démontre l'orientation correcte de l'ADN-T dans le génome de la variété MON 95275. Les données de séquençage ont confirmé que l'intégration de l'ADN-T s'est produite dans une région non codante du génome et n'a pas perturbé les éléments génétiques endogènes.

Le SNG a également été utilisé pour confirmer l'absence de séquences appartenant au squelette du vecteur et l'excision du marqueur de sélection cp4-epsps dans cinq générations (F4, F4F1, F5, F5F1 et F6) de la variété MON 95275. Les données de SNG ont confirmé l'excision du marqueur de sélection cp4-epsps, qui a été remplacé comme prévu par un seul site loxP dans le génome de la variété MON 95275. Les données de SNG ont également démontré l'absence de toute séquence appartenant aux squelettes des vecteurs PV-ZMIR525664 ou PV-ZMOO513642, y compris l'absence du gène nptII.

L'ADN-T intégré présente des délétions aux extrémités des bordures Droites et Gauches, ce qui se produit souvent lors de la transformation par Agrobacterium. Une coinsertion de 6 pb dans la région génomique 3' flanquante et une différence d'un seul nucléotide dans une séquence intermédiaire ont également été identifiées. En outre, une délétion de 746 pb a été trouvée dans l'ADN génomique au niveau du site d'insertion de l'ADN-T. Ces délétions à l'intérieur de l'insertion de l'ADN-T ont été identifiées dans la région flanquante 3' génomique. Ces délétions dans la séquence d'insertion de l'ADN-T et dans l'ADN génomique ont été attribuées aux mécanismes de réparation des cassures double brin dans la plante au cours du processus de transformation médié par Agrobacterium. L'analyse des cadres de lecture ouverts (ORF) effectuée par le requérant démontre que ces délétions ne donnent lieu à aucun ORF putatif présentant une similitude avec des toxines ou des allergènes connus.

Des analyses bioinformatiques des ORF putatifs (définis comme toute séquence d'un codon stop à un autre codon stop) dans les six cadres de lecture ont été effectuées à la fois sur le site d'insertion de l'ADN-T I séquencé et sur les séquences de jonction pour rechercher des similitudes avec des allergènes et des toxines connus et putatifs. Les protéines séquencées putatives ont été recherchées dans la base de données AD_2021, la base de données de protéines de toxines Uniprot (TOX_2021) et la base de données de protéines GenBank (PRT_2021). Aucun alignement biologiquement pertinent n'a été trouvé chez la variété MON 95275.

La stabilité génétique de l'insert d'ADN-T dans le génome de la variété MON 95275 a été démontrée en évaluant des plantes individuelles de la variété MON 95275 de cinq générations (F4, F4F1, F5, F5F1, et F6) au moyen du SNG. Les résultats indiquent que l'insert d'ADN-T est intact et stable sur les cinq générations de la variété MON 95275. Une analyse PCR a été réalisée sur 3 générations (F4F2, F4F3, et F4F4) et a démontré que l'insert d'ADN-T de la variété MON 95275 ségrégerait conformément aux principes mendéliens de l'hérédité pour un locus génétique unique.

Informations sur le produit

La variété MON 95275 se distingue de ses homologues traditionnels par l'expression des protéines insecticides Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 ainsi que de l'ARNdb DvSnf7.1. Ces niveaux de protéines insecticides et d'ARNdb ont été déterminés à différentes phases de croissance dans divers tissus végétaux au moyen d'un test immuno-enzymatique (ELISA) validé et d'un test QuantiGene® Plex 2.0, respectivement, dans le cadre d'un essai en champ multi-sites utilisant un plan en blocs complets randomisés. Cinq sites représentatifs des régions productrices de maïs les plus courantes aux États-Unis ont été utilisés avec quatre blocs sur chaque site, ce qui a donné un total de 20 échantillons par tissu testé pour chaque substance notifiée donnée.

En phase R1, les soies contiennent le niveau le plus élevé de protéines Vpb4Da2 et Mpp75Aa1.1, tandis que les feuilles et les racines contiennent le niveau le plus élevé d'ARNdb DvSnf7.1. À maturité, les niveaux moyens de la protéine Vpb4Da2, de la protéine Mpp75Aa1.1 et de l'ARNdb DvSnf7.1 dans les grains étaient respectivement de 1,2±0,086, 1,3±0,086 et 0,28x10^-3 ±0,021x10^-3 μg/g de poids sec de tissu.

La protéine complète Mpp75Aa1.1 à l'étude, codée par le gène mpp75Aa1.1, a une longueur de 295 acides aminés et un poids moléculaire d'environ 35,2 kDa. La protéine complète Vpb4Da2 à l'étude, codée par le gène vpb4Da2, a une longueur de 937 acides aminés et un poids moléculaire d'environ 104,9 kDa.

Pour évaluer l'innocuité des deux protéines insecticides, les protéines recombinantes Vpb4Da2 et Mpp75Aa1.1 ont été exprimées dans un système d'expression microbien et utilisées comme substituts des protéines exprimées par la variété MON 95275. L'équivalence entre les protéines produites par voie microbienne et celles de la variété MON 95275 a été établie par SDS-PAGE, immunobuvardage de type Western, glycosylation des protéines, analyse des séquences N-terminales/empreintes de masse par LC-MS/MS, et par un test biologique sur insectes contre les larves de la chrysomèle des racines du maïs. Les résultats de ces analyses concluent que les protéines produites par voie microbienne sont équivalentes à leurs homologues complètes produites par la variété MON 95275, et qu'elles peuvent donc être utilisées comme un matériel d'essai approprié pour les études d'innocuité des protéines.

L'ARNdb DvSnf7.1 complet a une taille d'environ 1,4 kb et a une longueur de 1014 pb. L'analyse par buvardage de type Northern a révélé trois principales isoformes de transcrits de translecture qui se distinguent par leur niveau d'épissage par rapport au gène endogène voisin se trouvant adjacent à l'extrémité 3' du site d'insertion. L'innocuité de ces isoformes de transcrits de translecture inattendues a été examinée en classant le positionnement de chaque codon de départ se trouvant en aval des séquences inversées doubles de dvSnf7.1 et en évaluant la similarité de toutes les séquences putatives identifiées au moyen de l'analyse des cadres de lectures ouverts (ORF) par rapport à des allergènes et toxines connus. Tous les ORF identifiés présentaient des codons de départ dans de mauvais contextes de traduction et aucun alignement biologiquement pertinent n'a été trouvé.

Au lieu d'utiliser l'ARNdb DvSnf7.1 (1014 bp) pour réaliser des études toxicologiques, la compagnie a utilisé l'ARNds DvSnf7 synthétisé in vitro (968 bp) mit à l'étude dans le cadre de la variété de maïs MON 87411 précédemment évalué^{Note de bas de page 2}. Pour ce faire, la compagnie a établi l'équivalence entre l'ARNdb DvSnf7.1 dérivé de la variété MON 95275 (y compris les transcrits de translecture) et l'ARNdb DvSnf7.1 synthétisé in vitro au moyen du séquençage de leur ADNc rétrotranscrit, de la dégradation de la RNase I_f suivie d'un buvardage de type Northern, et d'un essai LC₅₀ contre les larves de la chrysomèle maculée du concombre^{Note de bas de page 3}. Deuxièmement, la compagnie a établi l'équivalence entre l'ARNdb DvSnf7 dérivé de la variété de maïs MON 87411 et l'ARNdb DvSnf7 synthétisé in vitro au moyen d'un essai LC₅₀ contre les larves de la chrysomèle maculée du concombre et de la dégradation de la RNase I_f suivie d'un buvardage de type Northern. Troisièmement, les mêmes tests ont été effectués sur les ARNdb DvSnf7.1 et DvSnf7 in vitro, lesquels n'ont montré aucune différence significative entre les valeurs LC₅₀ et ont confirmé la présence de la région active double brin de 240 pb dans les deux ARNdb. Sur la base de ce raisonnement en trois étapes et des données comparatives, le Bureau des dangers microbiens a conclu que l'ARNdb DvSnf7.1 dérivé de la variété MON 95275 est équivalent à l'ARNdb DvSnf7 synthétisé in vitro (968 pb) mit à l'étude dans le cadre de la variété de maïs MON 87411 précédemment évalué.

Sur la base des informations fournies, l'utilisation alimentaire du maïs MON 95275 ne suscite aucune inquiétude d'un point de vue moléculaire.

Exposition alimentaire

On s'attend à ce que le maïs MON 95275 soit utilisé dans des applications similaires à celles des variétés de maïs conventionnelles. Le requérant ne prévoit pas de changement significatif dans l'utilisation alimentaire du maïs avec l'introduction du maïs MON 95275.

Nutrition

Le requérant a fourni des données sur la composition du maïs génétiquement modifié MON 95275 et du contrôle conventionnel génétiquement similaire (non génétiquement modifié LH244+HCL617) obtenues à partir d'échantillons de grains récoltés lors de cinq essais en champ menés aux États-Unis au cours de la saison de croissance 2019. Chaque essai en champ a été planté avec quatre répétitions de chacun des maïs modifié et conventionnel dans un plan en blocs complets randomisés.

Les échantillons ont été analysés selon des méthodes acceptables pour les métabolites, les fibres, les acides aminés, les acides gras, les minéraux, les vitamines et les anti-nutriments. Les données fournies concernaient tous les éléments nutritifs et antinutritionnels clés décrits dans le document de l'Organisation de coopération et de développement économiques intitulé « Document consensus sur les considérations relatives à la composition des nouvelles variétés de maïs (Zea mays) : Nutriments clés pour l'alimentation humaine et animale, anti-nutriments et métabolites secondaires des plantes (en anglais seulement) » (2002).

Lorsqu'une différence statistiquement significative (valeur P < 0,05) a été identifiée entre le maïs modifié et son témoin conventionnel, la pertinence nutritionnelle de cette différence a été examinée en comparant la valeur de l'intervalle de contrôle (valeur maximale moins valeur minimale) du témoin conventionnel et la variabilité naturelle définie par l'intervalle des valeurs observées dans la littérature et rapportées dans la base de données sur la composition des cultures de maïs de l'Agriculture and Food Systems Institute.

Il n'y avait pas de différences statistiquement significatives entre le maïs MON 95275 et le contrôle conventionnel pour 54 des 61 composants analysés dans le grain. Pour les sept composants qui se sont révélés statistiquement significatifs (acide palmitique, acide stéarique, acide oléique, acide linoléique, acide arachidique, calcium et vitamine B6), les différences moyennes entre le maïs MON 95275 et le contrôle conventionnel étaient inférieures aux valeurs correspondantes de l'intervalle de contrôle, ce qui suggère que la modification génétique n'a pas plus d'impact sur les niveaux de ces composants que la variation naturelle observée au sein du contrôle conventionnel cultivé à plusieurs endroits.

Par conséquent, le Bureau des sciences de la nutrition n'a pas identifié d'enjeux nutritionnels liés à l'utilisation alimentaire du maïs MON 95275.

Données chimiques

Les données sur les résidus de contaminants chimiques n'ont pas été fournies, et aucune considération unique de contaminant n'a été identifiée en ce qui concerne le maïs MON 95275. En outre, il n'y a pas de limites maximales pour les contaminants spécifiques à cet aliment dans la Liste des contaminants et autres substances adultérantes dans les aliments ou dans la Liste des Concentrations maximales à l'égard de divers contaminants chimiques dans les aliments de Santé Canada.

Comme pour tout aliment ou ingrédient alimentaire vendu au Canada, il incombe au fabricant de l'aliment de s'assurer que son utilisation n'entraîne pas une violation de l'article 4(1)(a) et (d) de la Loi sur les aliments et drogues, qui stipule qu'il est interdit de vendre un aliment qui contient une substance toxique ou délétère ou qui est falsifiée. Si une concentration élevée d'un contaminant chimique est trouvée dans un type d'aliment, le Bureau d'innocuité des produits chimiques peut procéder à une évaluation des risques pour la santé humaine afin de déterminer s'il existe un enjeu d'innocuité potentiel et si des mesures de gestion des risques sont nécessaires.

Toxicologie

La Section d'évaluation toxicologique préalable à la mise en marché (SETPMM) a évalué l'innocuité du maïs MON 95275 en évaluant la toxicité potentielle des protéines insecticides Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 et de l'ARNds insecticide DvSnf7.1.

Les caractères de résistance aux insectes ne devraient pas modifier les habitudes de consommation du maïs au Canada, car ces caractères ne seraient pas apparents pour les consommateurs et ne conduiraient pas à la création de nouveaux aliments.

L'activation des protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2, et la liaison ultérieure de leurs régions centrales à des récepteurs d'insectes spécifiques impliquent une machinerie moléculaire spécifiquement présente dans l'intestin moyen des insectes, et la SETPMM considère donc que les risques potentiels pour l'homme et les autres vertébrés exposés à la protéine devraient être minimes. De même, l'ARNdb DvSnf7.1 a été conçu pour correspondre au gène snf7 de la chrysomèle des racines du maïs et pour supprimer spécifiquement l'expression de ce gène d'insecte par un mode d'action d'interférence ARN (ARNi), et il ne devrait pas présenter de risque pour l'homme.

Pour démontrer l'innocuité toxicologique des protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2, le requérant a fourni les résultats d'études de toxicité aiguë par voie orale chez la souris, menées conformément aux exigences des bonnes pratiques de laboratoire (BPL) de l'Agence américaine de protection de l'environnement (EPA) et à la directive OPPTS 870.1100 de l'EPA relative aux essais sur les effets sur la santé. Le matériel d'essai était la protéine Mpp75Aa1.1 ou Vpb4Da2 purifiée, produite dans un système d'expression utilisant Escherichia coli. Le Bureau des dangers microbiens (BDM) a confirmé que les protéines produites par E. coli étaient équivalentes du point de vue de leur innocuité à celles exprimées dans le maïs MON 95275, et qu'elles constituaient donc un matériel d'essai de substitution approprié pour étudier l'innocuité des protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 produites in planta.

Ni la protéine Mpp75Aa1.1 ni la protéine Vpb4Da2 n'ont démontré de signes apparents de toxicité aiguë chez la souris, à des doses de 2000 mg/kg pc et 5000 mg/kg pc, respectivement. La dose sans effet nocif observé (DSENO) pour la protéine Mpp75Aa1.1 et la protéine Vpb4Da2 était de 2000 mg/kg pc par jour et de 5000 mg/kg pc par jour, respectivement.

L'innocuité toxicologique des protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 a été évaluée en comparant l'homologie des acides aminés (aa) de ces protéines avec des toxines protéiques connues. La protéine Mpp75Aa1.1 partageait 25,9 % d'homologie avec la toxine epsilon de type B (ETXB) de Clostridium perfringens et la protéine Vpb4Da2 était homologue à 32,7 % avec l'antigène protecteur (PA) de Bacillus anthracis. Bien qu'il n'y ait pas de seuil consensuel accepté pour l'homologie d'aa avec des toxines connues, la SETPMM considère que des homologies globales de 25,9 % et 32,7 % ne suggèrent pas un degré élevé de similitude qui pourrait être préoccupant pour la santé humaine, d'autant plus que ces homologies ne concernaient que des régions hautement conservées dans les familles de protéines respectives et ne sont pas impliquées dans la médiation de la toxicité. Dans l'ensemble, les données bioinformatiques suggèrent que ni Mpp75Aa1.1 ni Vpb4Da2 ne sont susceptibles de se comporter comme des toxines.

Le requérant a fourni des estimations de l'apport alimentaire pour les protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 qui résulterait de la consommation de la variété de maïs MON 95275. La marge d'exposition (ME) entre la DSENO pour la protéine Mpp75Aa1.1 (2000 mg/kg pc par jour) et l'exposition estimée à la protéine Mpp75Aa1.1 dans la population générale (2,2 μg/kg pc par jour) est de 9,0 x 10⁵. De même, la ME entre la DSENO pour la protéine Vpb4Da2 (5000 mg/kg pc par jour) et l'exposition estimée à la protéine Vpb4Da2 dans la population générale (2,0 μg/kg pc par jour) était de 2,5 x 10⁶. Étant donné que ces estimations ne prenaient en compte que les consommateurs, qu'elles étaient basées sur les 90e percentiles pour la consommation de produits à base de maïs, qu'elles supposaient que tous les produits à base de maïs consommés étaient dérivés de la variété MON 95275 et qu'il n'y a pas de réduction des niveaux de protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 en raison de la cuisson ou de la transformation (ce qui n'est probablement pas le cas), la SETPMM considère que ces ME sont sécuritaires.

Le transcrit de l'ARNdb DvSnf7.1 exprimé par le maïs MON 95275 a été jugé par le BDM comme étant équivalente à l'ARNdb DvSnf7 exprimée par le maïs MON 87411 précédemment approuvée, ce qui suggère que cet ARN exprimé est déjà présent dans l'approvisionnement alimentaire canadien. Aucun effet indésirable lié à la consommation d'aliments dérivés du maïs MON 87411 n'a été signalé.

L'innocuité du transcrit de l'ARNdb DvSnf7 dans le maïs MON 87411 précédemment approuvé a été démontré par une étude de toxicité orale de 28 jours chez la souris, qui a été précédemment révisée par la SETPMM. Cette étude a été menée dans le respect des principes de BPL et conformément à la ligne directrice 407 de l'OCDE sur les essais. Aucun effet indésirable n'a été constaté et la DSENO de cette étude était de 100 mg/kg pc par jour. Puisque le BDM a confirmé que les transcrits d'ARN propres à la variété MON 87411 et la variété MON 95275 sont équivalentes, la DSENO de 100 mg/kg pc par jour peut être appliquée à l'ARNds de DvSnf7.1 de MON 95275 par le principe de lecture croisée.

Rien n'indique que l'ARNdb DvSnf7.1 exprimé par le maïs MON 95275 sera traduit en protéines, car la structure secondaire produite par la séquence répétitive inversée interne tend à interférer avec la traduction. Les séquences aa des protéines potentielles codées par l'ARNdb DvSnf7.1 n'ont montré aucune homologie significative avec des toxines connues.

La séquence de transcription de l'ARNdb DvSnf7.1 impliquée dans un mode d'action basé sur l'ARNi n'a pas montré d'homologies significatives avec des séquences d'ARN humain ou des séquences d'ARN d'autres organismes hors cible. Par conséquent, il est très peu probable que l'ARNdb DvSnf7.1 ait des effets de liaison hors cible et de suppression de gènes.

La ME entre la DSENO de 28 jours pour l'ARNdb DvSnf7.1 (100 mg/kg pc par jour) et l'exposition estimée de l'ARNdb DvSnf7.1 dans la population générale (0,0005 μg/kg pc par jour) est de 2,0 x 10⁸. La SETPMM considère cette ME comme étant sécuritaire. En outre, elle est considérée comme une sous-estimation étant donné que les niveaux de l'ARNdb DvSnf7.1 dans le maïs MON 95275 devraient être réduits par le traitement et la cuisson et que l'ARN alimentaire ingéré est généralement dégradé par les nucléases dans la salive, les conditions acides dans l'estomac et les enzymes digestives supplémentaires dans l'intestin grêle. En outre, il existe une barrière physique (c'est-à-dire le mucus et les membranes cellulaires) qui limite l'absorption de l'ARN alimentaire par les cellules gastro-intestinales. Par conséquent, de l'apport alimentaire estimé pour l'ARNdb DvSnf7.1, seule une très petite fraction devrait être absorbée après ingestion orale.

Sur la base des informations disponibles, la SETPMM n'a pas identifié de problèmes d'innocuité toxicologique des aliments liés à l'utilisation du maïs MON 95275, telle qu'elle est proposée.

Allergénicité

Le maïs (Z. mays) n'est pas considéré comme un aliment allergène courant (OCDE, 2002^{Note de bas de page 4}) et ne figure pas sur la liste des allergènes alimentaires prioritaires de Santé Canada. Les organismes donneurs respectifs des gènes mpp75Aa1.1 et vpb4Da2 sont également très répandus et ne sont pas des sources connues d'allergènes.

Pour démontrer l'innocuité des protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 produites par le maïs MON 95275, le requérant a fourni les résultats de recherches d'homologie d'aa avec des allergènes connus, ainsi que des études de digestibilité simulée in vitro et des études de thermostabilité.

Les séquences d'aa des protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 ont été comparées à la base de données COMPARE (COMprehensive Protein Allergen Resource) de l'Institut des sciences de la santé et de l'environnement (HESI). Plus précisément, les comparaisons suivantes ont été effectuées : (1) alignement de la séquence complète en aa, pour évaluer l'homologie globale; (2) alignement par fenêtre coulissante de 80 aa, pour évaluer l'homologie structurelle; et (3) recherche de correspondance d'identité de 8 aa pour évaluer l'homologie avec des épitopes potentiels d'immunoglobuline E (IgE). Selon le Codex Alimentarius, les protéines qui partagent des homologies sur toute leur longueur ou de fenêtre coulissante de 80 aa supérieures à 35 %, ou des correspondances exactes de 8 aa, avec des allergènes alimentaires connus peuvent signifier un risque de réaction croisée. Ni la protéine Mpp75Aa1.1 ni la protéine Vpb4Da2 n'ont partagé d'homologies sur toute leur longueur ou de fenêtre coulissante de 80 aa supérieures à 35 % ou de correspondances exactes de 8 aa avec des allergènes de la base de données COMPARE. Ces résultats suggèrent qu'il est peu probable que les protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 réagissent de manière croisée avec des allergènes alimentaires connus lorsqu'elles sont ingérées au travers du maïs MON 95275.

Il existe un lien entre la résistance des protéines alimentaires à la digestion gastro-intestinale et la probabilité qu'elles déclenchent une allergie. La sensibilité de la protéine Mpp75Aa1.1 et de la protéine Vpb4Da2 produites par le maïs MON 95275 à la digestion dans des conditions représentatives du tractus gastro-intestinal humain a été évaluée en soumettant des protéines équivalentes (c'est-à-dire Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 produites par E. coli) à des essais in vitro de simulation de liquide gastrique et de simulation de liquide intestinal. Les protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 ont été complètement dégradées dans les 10 premières minutes d'incubation dans le liquide gastrique simulé, contenant de la pepsine, et dans les 2 heures d'incubation dans le liquide intestinal simulé (contenant de la pancréatine). Après ingestion de produits alimentaires dérivés du maïs MON 95275, les protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 devraient être rapidement et complètement digérées. La SETPMM conclut qu'il est peu probable que les peptides des protéines Mpp75Aa1.1 ou Vpb4Da2 persistent suffisamment longtemps dans le tube digestif pour interagir avec le système immunitaire et déclencher une réaction allergique.

Les études de thermostabilité ont montré que les protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 perdent leur activité structurelle et fonctionnelle lorsqu'elles sont chauffées à des températures supérieures à 55°C pendant plus de 15 minutes. Étant donné que les conditions normales de traitement et de cuisson des produits alimentaires à base de maïs impliquent un chauffage, on s'attend à ce que les protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 soient dénaturées et inactivées avant la consommation. Par conséquent, les protéines Mpp75Aa1.1 et Vpb4Da2 ne devraient pas se comporter comme des allergènes lorsqu'elles sont ingérées dans le maïs MON 95275.

Presque tous les allergènes alimentaires sont des protéines. L'ARNdb DvSnf7.1 exprimé par la variété MON 95275 n'est pas une protéine et il est très peu probable qu'il soit traduit en protéine. Les séquences en aa des protéines potentielles codées par l'ARNdb DvSnf7.1 ont été recherchées dans la base de données COMPARE sur les allergènes. Il n'y a pas eu d'homologies de pleine longueur ou de fenêtre coulissante de 80 aa supérieures à 35 %, ni de correspondances peptidiques exactes de 8 aa, pour aucune des protéines et aucun des peptides hypothétiques. Cela suggère que, même si l'ARNdb DvSnf7.1 était traduit en une protéine et consommé dans le maïs MON 95275, il est très peu probable que la protéine résultante se comporte comme un allergène.

La SETPMM a déterminé que le maïs MON 95275 notifié ne devrait pas poser de problèmes supplémentaires d'innocuité allergénique pour les consommateurs par rapport au maïs conventionnel.

Conclusion

L'examen effectué par Santé Canada des informations présentées à l'appui de l'utilisation de la variété de maïs résistant aux insectes MON 95275 ne soulève pas de préoccupations liées à l'innocuité des aliments.

L'avis de Santé Canada ne porte que sur l'utilisation alimentaire du maïs MON 95275. Les questions relatives à son utilisation en tant qu'aliment pour animaux ont été traitées séparément dans le cadre des processus réglementaires existants au sein de l'Agence canadienne d'inspection des aliments.

Ce document d'Information sur les nouveaux aliments a été préparé pour résumer l'avis concernant le produit en question fourni à la Direction des aliments et de la nutrition, Direction générale des produits de santé et des aliments, Santé Canada. Cet avis est fondé sur l'examen approfondi des informations soumises par le requérant conformément aux Lignes directrices sur l'évaluation de l'innocuité des aliments nouveaux.

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